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河北医科大学学位论文使用授权及知识产权归属承诺
河北医科大学
学位论文使用授权及知识产权归属承诺
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研究蝴名:桫f7翩J ’I
学院领导签名
弓月菇日
河北医科大学 研究生学位论文独创性声明
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中文摘要甲状腺相关眼病眼眶前脂肪细胞的诱导分化及原
中文摘要
甲状腺相关眼病眼眶前脂肪细胞的诱导分化及原
子力显微镜下的形态学观察
摘 要
目的:研究I艮I巨-前脂肪细胞原代培养及诱导分化的方法 并对其进行鉴定;探索利用原子力显微镜(Atomic force microscopy,arM)观察人眼眶前脂肪细胞的最佳方法;利用 AFM观察甲状腺相关眼病(Thyroid.associated Ophthalmopathy,TAO)患者和正常眼眶前脂肪细胞膜表面 的形态学异同,利用AFM观察TAO患者和正常眼眶前脂肪 细胞分化为成熟脂肪细胞过程中细胞膜表面的形态学异同; 并探讨其可能的分化和发病机制。
方法:@TAO患者手术切除的15ffll艮1Nll肪组织培养所 获的前脂肪细胞作为实验组,眼眶良性肿瘤手术中切除的15 例正常脂肪组织培养所获得的前脂肪细胞作为正常对照。
②采用组织块培养法和胶原酶消化法分离培养TAO患者 及正常眼眶前脂肪细胞,对细胞形态学进行观察;通过MTT 法观察前脂肪细胞活力及生长状况;加入适当的诱导分化因 子,观察人眼眶前脂肪细胞的增殖与分化过程;通过使用油 红O对细胞进行染色,观察诱导分化前后细胞脂质含量的变 化;免疫细胞化学方法检测细胞分化不同时期S.100蛋白的表 达情况。
③采用不同浓度戊二醛溶液对细胞进行固定,摸索出适 合AFM扫描的最佳固定浓度;用AFM观察TAO与正常l艮1ff_前 脂肪细胞膜表面的形态学特点;用AFM观察分别在诱导分化
中文摘要的第2,8,16d
中文摘要
的第2,8,16d TAO与正常蟊畏眶前脂肪细胞膜表面形态学差
异。
结果:①使用组织块培养法和酶消化培养法从量AO患者 和正常眼眶脂肪组织中均分离培养出大量螺旋状生长的长 梭形细胞。相较组织块培养法,酶消化法得到的细胞纯度高, 数量多,细胞形态好,适合于AFM标本的制备。
②使用酶消化法得到的前脂肪细胞特点:来源于脂肪组 织,长梭形;生长曲线为“S形,第3.1 ld为对数生长期; 免疫细胞化学S一100蛋白表达弱阳性;诱导分化2d后细胞出现 微小脂滴,脂滴数量逐渐增多,至分化第16d至t达高峰,可 被油红O染为红色,S.100蛋白表达阳性细胞数增加。
③使用AFM观察TAO患者及正常眼眶前脂肪细胞。发
现扫描范围为80哪时两种细胞均为长梭形,细胞均直径
809m,未观察到明显的差异。扫描范围为lpm时两种细胞 表面出现大小不等的颗粒状物质,TAO患者细胞膜表面相对 粗糙,隆起结构起伏较大,排列疏密不均,其平均粗糙度为 36.480+8。146nm;正常前脂肪细胞膜表面相对光滑,隆起结 构起伏较小,排列疏密均匀,其平均粗糙度为 32.189+7.819nm;相比较两组细胞膜粗糙度,TAO组较对照 组粗糙度明显增加(p0.01)。
④使用AFM观察TAO患者及正常眼眶前脂肪细胞诱导 分化为脂肪细胞的过程。发现扫描范围为80}tm时,随着分 化时间延长,细胞形态均由梭形变为多角形再变为椭圆形。 扫描范围为l岬时,分化第2,8,16d两神细胞表面出现较
密集的颗粒状物质,随着分化时间的延长,细胞膜表面粗糙 变大,隆起变高,至16d达到高峰;TAO患者前脂肪细胞在
中文摘要同一时间膜表面粗糙度均大于正常细胞(p0.05)。
中文摘要
同一时间膜表面粗糙度均大于正常细胞(p0.05)。 结论:①酶消化法较组织块法所得到的前脂肪细胞数量
更多,纯度更高。②前脂肪细胞在体外可被诱导分化为脂肪 细胞。③S.100蛋白表达水平可作为评价出现脂滴多少的指 标。@AFM可以清楚直观的观察到TAO患者及正常眼眶前 脂肪细胞膜的微观结构及三维成像情况,是一种较好的观察 细胞膜表面微观形态的工具。@TAO患者前脂肪细胞较正常 细胞膜表面粗糙;分化过程中,TAO患者及正常膜表面粗糙 度增加,同一时间,TAO患者前脂肪细胞膜
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