甲状腺相关眼病眼眶前脂肪细胞的诱导分化及原子力显微镜下的形态学观察-眼科学专业论文.docxVIP

甲状腺相关眼病眼眶前脂肪细胞的诱导分化及原子力显微镜下的形态学观察-眼科学专业论文.docx

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河北医科大学学位论文使用授权及知识产权归属承诺 河北医科大学 学位论文使用授权及知识产权归属承诺 本学位论文在导师(或指导小组)的指导下,由本人独立完成。 本学位论文研究所获的研究成果,其知识产权归河北医科大学所有。 河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表与学 位论文主要内容相关的论文,第一署名单位为河北医科大学,试验材 料、原始数据、申报的专利等知识产权均归河北医科大学所有。否则, 承担相应的法律责任。 研究蝴名:桫f7翩J ’I 学院领导签名 弓月菇日 河北医科大学 研究生学位论文独创性声明 本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果,除了 文中特别加以标注和致谢等内容外,文中不包含其他人已经发表或撰 写的研究成果,指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写, 文责自负。 研究雌孙j!唧剔币 月∥日 中文摘要甲状腺相关眼病眼眶前脂肪细胞的诱导分化及原 中文摘要 甲状腺相关眼病眼眶前脂肪细胞的诱导分化及原 子力显微镜下的形态学观察 摘 要 目的:研究I艮I巨-前脂肪细胞原代培养及诱导分化的方法 并对其进行鉴定;探索利用原子力显微镜(Atomic force microscopy,arM)观察人眼眶前脂肪细胞的最佳方法;利用 AFM观察甲状腺相关眼病(Thyroid.associated Ophthalmopathy,TAO)患者和正常眼眶前脂肪细胞膜表面 的形态学异同,利用AFM观察TAO患者和正常眼眶前脂肪 细胞分化为成熟脂肪细胞过程中细胞膜表面的形态学异同; 并探讨其可能的分化和发病机制。 方法:@TAO患者手术切除的15ffll艮1Nll肪组织培养所 获的前脂肪细胞作为实验组,眼眶良性肿瘤手术中切除的15 例正常脂肪组织培养所获得的前脂肪细胞作为正常对照。 ②采用组织块培养法和胶原酶消化法分离培养TAO患者 及正常眼眶前脂肪细胞,对细胞形态学进行观察;通过MTT 法观察前脂肪细胞活力及生长状况;加入适当的诱导分化因 子,观察人眼眶前脂肪细胞的增殖与分化过程;通过使用油 红O对细胞进行染色,观察诱导分化前后细胞脂质含量的变 化;免疫细胞化学方法检测细胞分化不同时期S.100蛋白的表 达情况。 ③采用不同浓度戊二醛溶液对细胞进行固定,摸索出适 合AFM扫描的最佳固定浓度;用AFM观察TAO与正常l艮1ff_前 脂肪细胞膜表面的形态学特点;用AFM观察分别在诱导分化 中文摘要的第2,8,16d 中文摘要 的第2,8,16d TAO与正常蟊畏眶前脂肪细胞膜表面形态学差 异。 结果:①使用组织块培养法和酶消化培养法从量AO患者 和正常眼眶脂肪组织中均分离培养出大量螺旋状生长的长 梭形细胞。相较组织块培养法,酶消化法得到的细胞纯度高, 数量多,细胞形态好,适合于AFM标本的制备。 ②使用酶消化法得到的前脂肪细胞特点:来源于脂肪组 织,长梭形;生长曲线为“S形,第3.1 ld为对数生长期; 免疫细胞化学S一100蛋白表达弱阳性;诱导分化2d后细胞出现 微小脂滴,脂滴数量逐渐增多,至分化第16d至t达高峰,可 被油红O染为红色,S.100蛋白表达阳性细胞数增加。 ③使用AFM观察TAO患者及正常眼眶前脂肪细胞。发 现扫描范围为80哪时两种细胞均为长梭形,细胞均直径 809m,未观察到明显的差异。扫描范围为lpm时两种细胞 表面出现大小不等的颗粒状物质,TAO患者细胞膜表面相对 粗糙,隆起结构起伏较大,排列疏密不均,其平均粗糙度为 36.480+8。146nm;正常前脂肪细胞膜表面相对光滑,隆起结 构起伏较小,排列疏密均匀,其平均粗糙度为 32.189+7.819nm;相比较两组细胞膜粗糙度,TAO组较对照 组粗糙度明显增加(p0.01)。 ④使用AFM观察TAO患者及正常眼眶前脂肪细胞诱导 分化为脂肪细胞的过程。发现扫描范围为80}tm时,随着分 化时间延长,细胞形态均由梭形变为多角形再变为椭圆形。 扫描范围为l岬时,分化第2,8,16d两神细胞表面出现较 密集的颗粒状物质,随着分化时间的延长,细胞膜表面粗糙 变大,隆起变高,至16d达到高峰;TAO患者前脂肪细胞在 中文摘要同一时间膜表面粗糙度均大于正常细胞(p0.05)。 中文摘要 同一时间膜表面粗糙度均大于正常细胞(p0.05)。 结论:①酶消化法较组织块法所得到的前脂肪细胞数量 更多,纯度更高。②前脂肪细胞在体外可被诱导分化为脂肪 细胞。③S.100蛋白表达水平可作为评价出现脂滴多少的指 标。@AFM可以清楚直观的观察到TAO患者及正常眼眶前 脂肪细胞膜的微观结构及三维成像情况,是一种较好的观察 细胞膜表面微观形态的工具。@TAO患者前脂肪细胞较正常 细胞膜表面粗糙;分化过程中,TAO患者及正常膜表面粗糙 度增加,同一时间,TAO患者前脂肪细胞膜

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