应用基因组改组选育耐糖L-乳酸高产菌株.PDF

※生物工程 食品科学 2007, Vol. 28, No. 09 369 1 2 2 1, 于 雷 ，雷 霆 ，裴晓林 ，刘景圣 * (1.吉林农业大学食品科学与工程学院，吉林 长春 130118； 2.吉林大学 分子酶学工程教育部重点实验室，吉林 长春 130023) ：本研究应用基因组改组提高鼠李糖乳杆菌的耐糖能力，进而提高L- 乳酸的产量。通过紫外线和亚硝基胍 诱变方法获得8株改良出发菌株。考察了氨基酸前处理和变溶菌素对原生质体形成的影响。利用双亲灭活的原生质 体进行递进式融合，经过两轮基因组改组和碳酸钙高糖平板及摇瓶筛选，选育出了耐糖改组菌株 F2-2 。在初糖浓 度为150g/L发酵罐中，F2-2的乳酸产量为140g/L，是野生型乳杆菌的1.8 倍。结果表明基因组改组技术能够快速 提高乳酸菌耐糖和产酸能力两个表型。 ：基因组改组；鼠李糖乳杆菌；耐糖L- 乳酸 Application of Genome Shuffling in Enhancing L-lactic Acid Production by Improving Glucose Tolerance of Lactobacillus rhamnosus 1 2 2 1, YU Lei ，LEI Ting ，PEI Xiao-lin ，LIU Jing-sheng * 370 2007, Vol. 28, No. 09 食品科学 ※生物工程 耐受高浓度葡萄糖乳杆菌的研究并不多。但是由于提高 合；发酵培养基：葡萄糖150g，糖蜜46.0ml，玉米浆 底物浓度，可以有效提高发酵液中乳酸浓度，降低下 53g，Tween80 2.0ml，MnSO4 0.4g，蒸馏水1000ml。 游过程的成本[5]，因此，通过提高乳酸菌的耐糖性进而 葡萄糖、糖蜜和玉米浆分别灭菌；原生质体缓冲液 提高乳酸产量是改良乳酸生产菌种的一个重要发展方 (LPB)：HEPES 20mmol/L，MgCl2 20mmol/L，蔗糖 向，受到国内外学者的关注。 0.5mol/L，pH7.0。聚乙二醇PEG 6000溶液(40%)、溶 基因组改组技术(genome shuffling)是分子定向进化 菌酶储液(100mg/ml)和变溶菌素储液(100μg/ml)均用灭菌 在全基因组水平上的延伸，将改组的对象从单个基因扩 LPB 缓冲液配制。 展到整个基因组 [ 6 ] 。它通过多个正突变体递进融合 1.2 方法 (recursive fusion)来进行基因组随机重组，快速筛选所需 1.2.1 菌种保存 表型有重大改进的菌株。2002 年以后，基因组改组已 鼠李糖乳杆菌原始菌株(以下称Lr-WT)与其突变体 经成功地应用于提高泰乐菌素的产量[7]、降解五氯苯酚 均采用 M R S 液体培养基进行培养，传代三次后分装， 的能力[8] [9] [10] 、乳杆菌的耐酸性 和羟基柠檬酸的生产 等微 加15%～25% 甘油于－ 80℃低温冰箱中冻存。 生物表型改良的研究中。本研究以产光学纯度99% 以上