酵母功能诊断法（FASAY）在肿瘤p53基因突变检测中的应用-遗传学专业论文.docxVIP

复旦大学硕士学位论文中文摘要 复旦大学硕士学位论文 中文摘要 本论文包括两部分内容： 1． 酵母酵母功能诊断法(FASAY)在肿瘤p53基因突变检测中的应用 肿瘤的发生是一个多步骤的过程，其中肿瘤抑制基因p53在大约50％肿 瘤中都会发生突变。酵母功能诊断法是一种在酵母菌株里利用ADE2报告基 因来检测p53基因状态的有效方法，通过该方法，我们检测了19例肝癌组 织样品和9倒脑癌组织样品，在肝癌组织样品中发现了1l例突变，脑瘤组 织样品中没有检测到该基因突变。通过分析肝癌组织样品中的突变，我们发 现以前在肝癌中出现的热点突交在我们检测的样品中出现频率也比较高，分 别是157位和249位密码子的突变，各有3例；另外，我们还检测到了一些 以前没有在肝癌中报导的新突变，包括62位密码子，124位密码子，264位 密码子的移码突变。P53突变检测的结果为我们分析肝癌的发生机理提供了 有益的线索。 关键词： 酵母功能诊断法肝癌p53突变 2．利用TAP／MS方法对酿酒酵母Arp2／3复合物的初步研究 串联亲和纯化(TAP)方法是一种蛋白质复合物纯化的强有的工具，能 对处于天然生理条件下的蛋白质复合物进行快速纯化，结合基质辅助的激光 解析，离子化飞行时间质谱(MALDI—TOF)分析，从而能大规模的分析整个 蛋白质组。我们建立了TAP／MS技术平台，并优化了一些纯化步骤。首先利 用该方法以Arp2蛋白为诱饵纯化得到了酿酒酵母Arp2／3复合物，并且鉴定 了该复合物中的蛋白质组分；另外我们还构建了一系列用于TAP纯化的酵母 菌株，为以后研究这些复合物打下了基础。 关键词：串联亲和纯化MALDI—TOF质谱Arp2／3复合物 复旦大学硕士学位论文ABSTRACT 复旦大学硕士学位论文 ABSTRACT This thesis consists oftwo parts： 1·Screening the p53 mutations in human tumors by using the yeast functional assay (FASAY) The development of a life threatening tumor is a multistep process，and the mutation of p53 tnnlor suppressor gene is identified in almost half of the human tumors．To screen the p53 mutation in human tumors，we established a yeast-based method， which COJ／assess the p53 status by the transcription of ADE2 reporter gene in Saccharomyces cerevisiae．We detected the mutation ofp53 in 1 1 of 19 HCC samples and 0 of 9 brain tumor samples by this method．In addition，By sequencing the p53 eDNA，we find two p53 mutations in 157 and 249 codon which belong to the mutation hotspot in HCC，and three framshifl mutations(codon 62，124，264)not reported in HCC．The relationships between p53 mutation and HCC Can help US to understand the disease mechanism． Keywords：yeast functional assay,HCC，p53 mntaion 2．The purification of Arp2／3 complex in Saccharomyces cerevisiae by tandem affinity purification(TAP)and MALDI-TOF The tandem affinity purification(TAP)method is a general procedure of protein complex purification，which can allow efficient and reliable recovery of proteins present at low cellular level under native conditions．W