高效液相色谱／挥发激光散射检测器测定奶粉和鸟粪中的甾体化合物.PDF

高效液相色谱／挥发激光散射检测器 测定奶粉和鸟粪中的甾体化合物 冯埃生 邹汉法* 张 冰 汪海林 张玉奎 （中国科学院大连化学物理研究所 国家色谱研究分析中心 大连 116011） 提 要 利用反相高效液相色谱／挥发激光散射检测器发展了分析甾体化合物的新方法，采用甲醇和水溶液为 冲洗体系，梯度淋洗，12种甾体类化合物在35min内得到很好的分离。方法简单快速，不需衍生，样品经固相萃 取预处理，回收率介于84.0％～?102.8％之间，响应值和浓度不呈简单的线性关系，在 5～50mg/L浓度范围内 对峰面积与浓度进行对数线性回归分析，得回归系数大于0.99。 关键词 反相高效液相色谱法，挥发激光散射检测器，奶粉，鸟粪，尢甾体化合物 分类号 O658 色谱工作站 （国家色谱研究分析中心），数字式移液 1 前言 管4710型(Eppendorf,Germany)。 甾体化合物是广泛存在于生物体组织内的一类 2.2 试剂 重要的有机化合物，具有十分重要的生理作用，因而 3a,6a-二羟基胆 酸 (hyodesoxycholicacid, 其分离分析受到人们的广泛关注 1（～?3）。利用高效液 HA);3-羰基-4-烯本胆酸 (?4-3-keto-etiocholonic 相色谱法成功分离甾体化合物的报道很多，但由于 acid,EA);3-乙酰基-7,12-二羰基胆酸 甲酯 甾体化合物的呈色基团在紫外区没有很强吸收，因 (methyl-3-acetyl-7,12-diketo-cholanate,MKAT); 而检测是关注的焦点之一。紫外检测分析有很广泛 胆酸甲酯(methyl-cholanate,MAT);3-羰基-12-乙 的应用4（），但不适于低浓度的甾尢体化合物的直接测 酰氧基胆酸 甲酯 (methyl-3-keto-12-acetoxy- 定。荧光检测分析需要柱前衍生5（）或柱后衍生6（），前 cholanate,MACT);3-羟基-本胆酸甲酯(methyl-3- 者耗时稍长，后者需要在色谱柱后另接一反应柱，降 hydroxy-etiocholanate,MET);Δ4-3-胆甾烯酮 (Δ4- 低了色谱柱的分离效果。由于通用的示差折光检测 cholesten-3-one,4CO);Δ1-3-胆 甾烯 酮 (Δ1- 器不适用于梯度洗脱，因此用它同时分析多种甾体 cholesten-3-one,1CO);胆 甾烷 醇 (cholestanol, 化合物比较困难 7（）。 COL);2a-甲基-5a-胆甾-3-酮(2a-methy1-5a- 挥发激光散射检测器(evaporativelight-scat- cholester-3-one,MCO);2,3-β-环氧基胆甾烷 teringdetector,ELSD)是一种通用型的检测器，我 (cholestane-2,3β-epoxid,COE);3,3-二甲氧基胆 们曾对这种检测器的基本性能作过考察8（，其响应 甾烷(3,3-dimethoxyl-cholestane,DME)等以上 12 值与被检测物的官能团和光学性质无关，对被检测 种甾体化合物均购自Sigma公司。甲醇为AR，经重 物不必标记或衍生，使样品处理过程简单，尤其是采 蒸，蒸馏水经Millipore-Q处理，奶粉为市售全脂奶 用梯度洗脱时，流动相全部挥发除去，因而基线平 粉，鸟粪取 自家养鹦鹉。 稳 。 2.3 色谱条件