课件：肿瘤研究与实验动物.ppt

目前繁殖裸鼠不用nu/nu雌鼠，因其繁殖性能低，一般采用杂合子交配方式或隐性纯合子雄性与杂合子雌鼠交配。此交配方法，其后代将出现表现型正常的仔鼠和裸鼠，比例为1：1。 纯合性雌裸鼠（nu/nu）受孕率低，乳腺发育不良，且有食崽习惯。一般采用纯合性雄鼠与杂合性雌鼠（nu/+）交配，可获的1/2纯合性后代。裸小鼠年龄增长或一些因素影响（病毒感染等），裸鼠体内正常T细胞增加，影响接种，一般选用4-8Wk。 新型免疫缺陷动物： 皮下移植于裸鼠人类恶性肿瘤，外科手术标本或体外培养细胞，原宿主体内是否转移，仅表现成活，低转移或不转移，形成局限性肿瘤，不易扩散。 提高裸鼠体内人类肿瘤转移性，改变宿主状态做大量工作：应用三周内幼鼠；附加各种射线照射；各种免疫抑制剂；提高裸鼠饲养洁净度减少Ag刺激，不满意。 世界各国相继培育出一系列免疫缺陷A：从单一T细胞功能缺陷到T、NK细胞（Beige-nu mice）缺陷，T、B细胞以及T、B 、NK细胞联合缺陷动物，肿瘤转移模型建立了新宿主A和研究工具。 T、NK细胞缺陷的Beige-nude Mice： 13号染色体缺陷。孙靖等将有T细胞缺陷无胸腺nude Mice Nu gene导入NK细胞缺陷 beige -Mice，育成T、NK细胞功能联合免疫缺陷beige-Mice，其体内转移瘤显著高于裸鼠组。 91年9月召开的第七届国际免疫缺陷A研讨会，引人注目一项发展是用人体淋巴细胞改建的Scid mice —研究人类免疫缺陷型病毒（HIV）感染模型。 T、B细胞联合缺陷Scid mice（Serious Conjunctive immune deficiency）： 由美国Bosma等发现并培育成功。BALB/cAn小鼠同类系C.B.-17近交系16号染色体基因突变形成。（DNA-PKcs：DNA依赖性蛋白催化亚单位基因缺陷）----16号染色体影响淋巴细胞抗原受体催化亚单位基因突变，编码结合点断裂。接受人类肿瘤移植后，成活率高，易于发生浸润和转移，在白血病和淋巴瘤的研究中更为突出，其病理过程和与人白血病的临床过程极为相似；植入人免疫系统称（SCID-hu）。 过去靠临床观察、体外实验或无免疫缺陷动物研究人免疫系统。人免疫系统结构复杂，功能繁多，影响面广，体外实验完全没有体内实验的整体效果，实验动物又与人存在着巨大种质差异，敏感性不同。寻找廉价、简单适用人免疫研究动物模型是生物医学者目标。 Orthotopic xenotransplantation（原位异种移植）： 人癌移植到与肿瘤原位部位相对应的裸鼠器官组织内，使其获得与人癌相似微环境。 Scid mice---腹腔注射—胎肝活细胞—人胎肝活细胞Scid小鼠模型。注射胸腺细胞--人胎肝活细胞Scid小鼠模型(1)。再注射胸腺细胞--人胎肝活细胞Scid小鼠模型（2）。（1）、（2）进行人肝癌细胞免疫—初始免疫反应。模型（1）、（2）抗体最高滴度出现时间无显著差异；出现水平差异显著（2）（1）。8只Scid 小鼠建模后4个月未出现瘦弱、贫血与死亡，无GVHR。 人肝癌移植在Scid 小鼠和BALB/C裸小鼠皮下生长结果 人癌细胞瘤 n 成瘤率 瘤体积/立方厘米 n 成瘤率 瘤体积 SCID BALB/C-nu/nu H128小细胞肺癌 51 90.2 16.5+8.1 26 57.7 6.3+2.9 SGC-7901胃腺癌 14 100 13.7+4.2 12 100 4.7+1.6 U251脑瘤 10 100 8.4+2.7 10 100 4.3+1.8 转基因技术和Scid 小鼠制作转基因免疫缺陷（癌基因插入Scid），不需移植肿瘤活组织或肿瘤细胞悬液，避免淋巴细胞潜在的感染，小鼠有高癌症发生率、转移率，研究免疫系统对肿瘤发生和转移理想模型。 动物肿瘤模型的选择 自发性肿瘤模型 特点：与实验方法诱发肿瘤相比，所患肿瘤与人更相似。有利将动物实验结果推用到人，着重观察遗传因素在肿瘤发生方面作用。 缺点：肿瘤发生情况参差不齐，不可能在短时间内获得大量肿瘤学资料，观察时间较长，实验耗费