体外培养单个造血干细胞试验方法的建立-中国药理学通报.PDFVIP

中国药理学通报　ＣｈｉｎｅｓｅＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌＢｕｌｌｅｔｉｎ　２０１２Ｍａｒ；２８（３）：４３５～８ ·４３５· 网络出版时间：２０１２－３－２１６：０３　网络出版地址：ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ／ｋｃｍｓ／ｄｅｔａｉｌ／３４．１０８６．Ｒ１６０３．２０１２０３．４３５＿０３１．ｈｔｍｌ ◇实验方法学◇ 体外培养单个造血干细胞实验方法的建立 李　乔，纪　庆，王金宏，许　静，田　晨，程　辉，刘延风，张　娜，程　涛，高瀛岱 （中国医学科学院血液病医院（血液学研究所）实验血液学国家重点实验室，天津　３０００２０） ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００１－１９７８．２０１２．０３．０３１ 　　造血干细胞一直是成体干细胞研究中的热点。基于最 文献标识码：Ａ 文章编号：１００１－１９７８（２０１２）０３－０４３５－０４ 近２０年以来实验技术的发展，ＨＳＣｓ的发育分化过程、ＨＳＣｓ 中国图书分类号：Ｒ３２９．２４；Ｒ３２９．２８；Ｒ３４１；Ｒ９６５．１ 池的维持等方面已经有比较透彻的研究。关于造血干、祖细 摘要：目的　通过建立一种体外稳定培养单个造血干细胞 胞的传统研究方法主要是建立体内、体外的造血模型，已有 的实验方法有： 将ＨＳＣｓ体内移植给受致死剂量照射的受 （ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃｓｔｅｍｃｅｌｌ，ＨＳＣ）的实验方法，在未来筛选可以 ① ［１］ 促进ＨＳＣ体外扩增的化合物。方法　通过配制 ＨＳＣｓ体外 体鼠（体内重建造血能力） 。该实验方法主要是观察研究 培养液并结合流式分选技术，我们建立了一种在体外不需要 ＨＳＣｓ在受体鼠体内归巢－自我更新－分化产生各系祖细胞 －分化产生血液系统的整个造血过程； 骨髓造血细胞的 基质细胞支持的，稳定的，高通量培养单个ＨＳＣ形成一个血 ② ［２］ 细胞集落的实验方法。结果　只需培养 １０～１４ｄ即可观察 体外克隆性生长实验 。测定长期培养启动细胞（ｌｏｎｇｔｅｒｍ 到化合物对ＨＳＣ的作用，并结合流式细胞分析技术替代人 ｃｕｌｔｕｒｅｉｎｉｔｉａｔｉｎｇｃｅｌｌｓ，ＬＴＣＩＣ）在体外基质细胞支持下形成 工计数血细胞分化情况，进一步节省人力，具有客观、重复性 鹅卵石样区域（ＣＡ）实验，即长周期 ＨＳＣｓ体外培养实验，主 强的特点，满足了高通量筛选药物的要求，为后续的研究和 要用于测定ＨＳＣｓ在体外有基质细胞支持的条件下自我更 新的能力，所需时间８～１２周； 通过计数 ＢＦＵＥ等各系 化合物筛选工作打下基础。为了验证此方法的可靠性，使用 ③ ［３］ ＢＩＯ（一种通过抑制糖原合成酶激酶３，进而可以促进 ＨＳＣ 分化集落 ，或通过血（细胞）涂片结合人工计数各系细胞 自我更新的化合物）时，实验结果与文献报道的研究结果一 比例，可以分析ＨＳＣｓ分化能力与分化水平。 致。结论　该实验方法在有关造血干细胞体外扩增的药物 　　可以看出，研究 ＨＳＣｓ的关键就在于建立造血模型，并 筛选方面具有很好的应用价值。