课件：金黄色葡萄球菌GB.ppt

金黄色葡萄球菌检验 金黄色葡萄球菌因思念、三全、湾仔码头事件而引发标准争议，在2011年12月21日实施的速冻食品新国标中，金黄色葡萄球菌从原来“不得检出”变为“限量检出”，但这一检测标准的改变并不代表可以忽略金黄色葡萄球菌的危害性。 金黄色葡萄球菌 Staphylococcus aureus 金黄色葡萄球菌：属于微球菌科，葡萄球菌属的；有“金葡菌”等别称 金葡菌是化脓性感染的常见致病菌，能导致肺炎，心包炎，毛囊炎，败血症，烫伤样皮肤症等 传播途径：水、食物等 超级细菌：耐甲氧西林金葡（万古霉素） 金黄色葡萄球菌生物特征 形态特征：革兰氏染色阳性，呈葡萄串状排列。 无鞭毛、 无芽胞、有荚膜（体外培养一般不产生）。 在陈旧培养物中，衰老的菌体常转为革兰氏阴性。 培养特性：最宜温度：37℃（6.5-46 ℃） 最适宜pH:7.4(4.2-9.3） 耐盐性：可在10%-15% NaCl，40%胆汁中生长 能产生色素、血浆凝固酶、接触酶、肠毒素等 金黄色葡萄球菌的检测方法 GB 4789.10-2016 ISO 6888 FDA(BAM) online chapter 12 化妆品卫生规范 USP/BP/EP …… GB4789.10-2016的主要变化 1.删除了英文名称 2.修改操作程序，删除了分离培养基血平板 3.删除了增菌液10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤（跟国际接轨，FDA，ISO等均无定性方法，且都使用7.5%氯化钠肉汤） 4.修改葡萄球菌肠毒素检验为可选项 定性检测——选择性增菌 步骤：称取25g样品至盛有225ml 7.5%氯化钠肉汤或10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤的容器中，均质。液体样品量取25mL。 作用：1，复苏细菌； 2，选择性增菌 操作要点：1，准确称（量）取； 2，按标准要求时间温度培养 定性检测——平板划线分离 步骤：分别用接种环取培养液1环，划线接种于一个Baird-Parker平板和一个血平板（，于36±1℃分别培养18-24h（血平板）或40-48h（ Baird-Parker平板） 作用：以划线方式在琼脂平板上分离出单菌落，通过单菌落的菌落形态判别出具有典型形态的可疑菌落进行下一步生化及血清实验确定。 操作要点：1，保持用于划线平板表面干燥 2，必须在平板中画出单菌落 3，用于划线平板需要现配现用 定性检测——平板划线分离 菌落形态：灰色到黑色，边缘常为淡色，周围为一混浊带，在其外缘常有一透明圈。 主要成分：卵黄亚碲酸钾、丙酮酸、甘氨酸、氯化锂 注意点： 一，卵黄亚碲酸钾需要预热到50℃左右，加入冷却到50℃培养基基础中； 二，长期保存的冷冻或干燥食品中菌落颜色较淡一些，外观可粗糙干燥。 定性检测——平板划线分离 菌落形态：白色或者金黄色菌落，周围有透明溶血环（β-溶血）。 主要成分：蛋白胨，牛肉粉，脱纤维羊血 注意点： 一，使用前观看平皿是否有干裂或染菌； 二，开封后未使用完的培养基要及时放于冰箱保存。 定性检测——血浆凝固酶鉴定试验 步骤：可疑菌落+5mLBHI→ 36 ℃±1 ℃培养18-24h； 0.5mL兔血浆+0.2-0.3mL BHI培养物→ 36 ℃±1 ℃培养6h； 每半小时观察； 同时设置阳性（如：ATCC 6538)、阴性（如：表葡 ATCC 12228) 阳性现象：试管倾斜或倒置时，呈现凝块，即凝固现象， 或凝固 体积大于原体积的一半。 注意点： 1，必须每半小时观察； 2，陈旧培养物（培养超过18-24h）或生长不良 的，可能导致假阴性； 3，不能使用甘露醇氯化钠琼脂上的菌落，高盐 可能导致假阴性。 GB 4789.10-2010 第一法：定性检测 第二法：平板计数法 第三法：MPN计数法 平 板 计 数 法 平板计数法——平板接种 步骤： 10倍系列梯度稀释，并选取2-3个适宜梯度； 每个梯度吸取1mL,以0.3，0.3,0.4mL分别接种3个BP平板； 涂布，完全吸收样液后，倒置培养； 选取3个平板菌落数合计20-200cfu的梯度平板，计数典型菌落数 挑去5个典型菌落（不够5个全挑）做血浆凝固酶实验。 注意点： 1，用于涂布平板必须干燥； 2，涂布是，涂布棒不要接触平板边缘 平板计数法——计算 选择合计菌落数在20-200的平板，计算典型菌落数。如果： a)只有一个稀释度平板菌落数在20-2