课件：第四章 微生物的遗传变异与菌种保藏.ppt

（二）液体石蜡保藏法 方法：斜面菌种，橡皮塞取代棉塞， 加液体石蜡油，置4～6℃冰箱 条件：低温、缺氧 适用范围：各类微生物 保藏时间：1～2年 （三）沙土管保藏法 方法：将菌种置于干燥砂土管中， 置4～6℃冰箱保藏。 条件：低温、干燥、缺营养 适用范围：孢子和芽孢 保藏时间：2～10年。 （四）-80℃冰箱冷冻保藏法 方法：将菌种置安瓿瓶中用脱脂牛 奶、血清做保护剂，置-80℃ 冰箱保藏。 条件：低温、缺氧、保护剂 适用范围：各种微生物 保藏时间：1～5年。 （五）真空冷冻干燥法 方法：将菌种置安瓿瓶中用脱脂牛 奶、血清做保护剂，冷冻干 燥后，置4～5℃保藏。 条件：干燥、低温、缺氧、保护剂 适用范围：三菌和病毒（不适用丝状 真菌） 保藏时间：5～10年 冻干管:广东省微生物菌种保藏中心 （五）液氮超低温保藏法 方法：用脱脂牛奶、甘油做保护 剂，保存于-70超低温冰箱 或液氮(-196 ～ -156℃ ) 条件：低温、保护剂 适用范围：各类微生物 保藏时间：数年，较理想的方法。 （六）磁珠保藏法 方法：将带菌磁珠置低温保藏 条件：低温 适用范围：各类微生物 保藏时间： 2～8℃ 6个月； -20℃ 1年； -80℃ 2年。 五、菌种的衰退和复壮 （一）菌种衰退 生长缓慢 产孢子能力丧失 产量降低 产物组份改变 对不良环境的抵抗能力降低 试验用菌株毒力增强或减弱 色素改变或消失 菌落或形态特征发生改变 科研用菌株遗传标志丢失 1.原有性状变化 控制传代次数 选择合适的培养条件 采用不同类型的细胞进行传代 采用有效的菌种保藏方法 2.防止菌种衰退的方法 （二）菌种复壮 从衰退的群体中找出未衰退的个体， 达到恢复该菌原有典型性状的措施。 使衰退的菌种恢复原来优良性状。 纯种分离 通过寄主体内生长进行复壮 淘汰已衰退的个体（采用比较激烈的理 化条件进行处理，死生命力较差的已衰 退个体） 采用有效的菌种保藏方法 1.菌种的复壮措施 菌种复壮的步骤： 纯种分离 生物学性状检测 生产性能检测 淘汰衰退的个体 未衰退的继续使用或保藏 平板划线法 涂布法 倾注法 单细胞挑取法 采用有效的菌种保藏方法 * （a）倾注 （b）涂布 A 平板划线法 倾注法 涂布法 1.微生物遗传与变异：物质基础是核酸。 方法 主要措施 适宜菌种 保藏期 斜面低温保藏法 低温 广泛 1～6月 液体石蜡保藏法 低温，缺氧 广泛 1～2年 沙土管保藏法 干燥，缺营养 产芽孢、孢子的微生物 2～10年 -80℃冰箱保藏法 低温、保护剂 广泛 1～5年 真空冷冻干燥法 干燥，低温，无氧，保护剂 广泛 5～10年或长期 液氮超低温保藏法 超低温，保护剂 广泛 ＞10年 磁珠保藏法 低温 广泛 6个月/1年/2年 小结 3.复壮常用的方法有分离纯化、通过宿主复壮、淘汰已衰退个体。 2.菌种保藏方法比较 资料可以编辑修改使用 学习愉快！ 课件仅供参考哦， 实际情况要实际分析哈！ 感谢您的观看 * 定义：转导：通过完全缺陷或部分缺陷噬菌体的媒介，把供体细胞的DNA小片段携带到受体细胞中，通过交换与整合，使后者获得前者部分遗传形状的现象。获得新遗传形状的受体细胞称为转导子（transductant） * 正常形态细菌 L型变异  正常霍乱弧菌 霍乱弧菌L型 青霉素、溶菌酶 抗体或补体 ? 42～43℃ 炭疽杆菌 不能形成芽胞,毒性减弱 10～20天???? 0.1%石炭酸 变形杆菌（有鞭毛） （无鞭毛） 二、菌落特征变异 光滑型菌落 粗糙型菌落??? S?????? R 原因：失去LPS的特异多糖 在陈旧培养基 中长期培养 三、毒力变异 β棒状噬菌体白喉棒状杆菌 获得白喉毒素 牛型