低盐胁迫下三疣梭子蟹蝗抗利尿肽基因的表达-中国水产科学.PDF

中国水产科学 2018 年9 月, 25(5): 967-975 Journal of Fishery Sciences of China 研究论文 DOI: 10.3724/SP.J.1118.2018.17405 低盐胁迫下三疣梭子蟹蝗抗利尿肽基因的表达 1, 3 2, 3 1, 3 2, 3 2, 3 孙东方 , 吕建建 , 环朋朋 , 高保全 , 刘萍 1. 上海海洋大学, 水产科学国家级实验教学示范中心, 上海 201306; 2. 青岛海洋科学与技术国家实验室, 海洋渔业科学与食物产出过程功能实验室, 山东 青岛 266071; 3. 中国水产科学研究院黄海水产研究所, 农业农村部海洋渔业可持续发展重点实验室, 山东 青岛 266071 摘要: 本研究采用RACE 技术克隆了三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)蝗抗利尿肽(neuroparsin, PtNP)基因。该 基因全长 1920 bp, 5端非编码区237 bp, 3端非编码区 1373 bp, 开放阅读框309 bp, 编码 102 个氨基酸, 预测分子 量 10.8 kD, 理论等电点7.42 。PtNP 含有 12 个半胱氨酸残基, 具十足目动物蝗抗利尿肽典型的特征。同源性和系 统进化分析表明, PtNP 与拟穴青蟹(Scylla paramamosain)NP4 的同源性最高(89%), 并且三疣梭子蟹与拟穴青蟹首 先聚为一支。组织表达分析发现, PtNP 基因在脑组织中的相对表达量最高, 其次是鳃和眼柄, 在卵巢、肌肉、心脏 和肝胰腺中表达量较低或不表达。通过分析PtNP 基因在低盐胁迫过程中的表达规律发现, 低盐胁迫可显著改变 PtNP 基因在脑、鳃和眼柄组织中的表达模式, 整体呈现上调表达趋势, 其中在脑、鳃和眼柄中表达量分别最高上 调至7.7 倍、2.8 倍和2.6 倍, 且存在显著差异(P0.05) 。去除眼柄后该基因在鳃中的表达呈上升趋势, 且去除双侧 眼柄组的表达量显著高于去除单侧眼柄组(P0.05) 。本研究结果表明PtNP 基因在三疣梭子蟹盐度适应中可能发挥 一定作用且受神经内分泌系统的调控。 关键词: 三疣梭子蟹; 蝗抗利尿肽; 基因克隆; 盐度胁迫; 去除眼柄; 表达分析 中图分类号: S917 文献标志码: A 文章编号: 10058737(2018)05096709 三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)属于甲 海水盐度急剧下降, 使得三疣梭子蟹体内渗透压 壳纲(Crustacea) 、十足目(Decapoda) 、梭子蟹科 失衡, 导致其生长缓慢, 疾病暴发。因此, 开展盐 (Portunidae), 是一种重要的海洋经济动物[1], 在 度适应机制研究对三疣梭子蟹耐盐良种的培育具 中国分布广泛。三疣梭子蟹可存活于盐度为 有重要意义。 13.7~47.7 的环境中, 属广盐性水生甲壳动物, 具 渗透压调节是甲壳动物进行盐度适应的重要 有生殖洄游习性, 常在港湾或河口低盐区排幼[2], 生理活动, 研究证明渗透压调节受神经内分泌系 深海高盐区越冬。盐度是影响三疣梭子蟹生长发 统调控, 其中神经肽在该过程中发挥了重要作 [4] 育至关重要的环境因子之一, 对其摄食、蜕皮、 用 。甲壳动物神经肽由甲壳动物中枢神经系统 生长、代谢、免疫等具有重要作用[3] 。耐盐性状, 尤 分泌, 通过内分泌方式直接或间接作用于靶器官, 其是耐低盐