使用多重置换扩（MDA）技术对单细胞基因组进行测序.pptVIP

使用多重置换扩增（MDA）技术对单细胞基因组进行测序 摘要 目前单细胞微生物可以通过对多重置换扩增反应（ MDA）得到的扩增DNA进行测序。在细菌中几个飞克 (10-15g)的DNA能扩增得到微克(10-6g)的高分子量DNA，扩增得到的DNA 适合DNA文库的构建和Sanger测序。MDA生成的DNA也可直接作为模板供焦磷酸测序。单个细胞间基因序列的联系也是一个功能强大的工具，它可用于对从环境DNA的提取物（宏基因组序列）得到的多重有机体通过鸟枪法测序来指导构建基因芯片。 背景知识 MDA是最近几年发展起来的一种全基因组扩增技术,它采用具有高度延伸活性的DNA聚合酶和耐核酸外切酶的随机引物在等温条件下对基因组进行扩增的方法,这种方法是以链置换为基础,最初被用于扩增巨大的环状DNA如质粒和噬菌体DNA,现在也被用于线型DNA的扩增,它能对全基因组进行高保真的均匀扩增, 扩增出10～100 kb大小的片段,能提供大量均一完整的全基因组序列。 MDA反应示意图 　　最近的工作表明了单细胞测序能有利的揭示环境和生理研究甚至从局部草案基因组中预测基因的存在。基因组数据还可以在这个过程中协助作用，最终发展为新的培养方法，这仍然是一个需要充分认识生物有机体的极为重要的目标。代谢途径的鉴定可以预测培养基和培养条件的设计。基于MDA的单细胞基因组学的另一个好处是它很容易自动化，并可以与高通量细