课件：化妆品中金黄色葡萄球菌检测.ppt

化妆品中金黄色葡萄球菌检测 组别：第六组 成员：钱龙 朱凯 许祥博 林志豪 简介 金黄色葡萄球菌 (Staphyloccocus aureus ) 是人类的一种重要病原菌，隶属于葡萄球菌属（Staphylococcus），有“嗜肉菌的别称，是革兰氏阳性菌的代表，可引起许多严重感染。而对于金黄色葡萄球菌在速冻食品中的存在量，卫生部于2011年11月24日公布食品安全国家标准《速冻面米制品》，允许金葡菌限量存在。 流行病学 金黄色葡萄球菌在自然界中无处不在，空气、水、灰尘及人和动物的排泄物中都可找到。因而，食品受其污染的机会很多。美国疾病控制中心报告，由金黄色葡萄球菌引起的感染占第二位，仅次于大肠杆菌。金黄色葡萄球菌肠毒素是个世界性卫生难题，在美国由金黄色葡萄球菌肠毒素引起的食物中毒，占整个细菌性食物中毒的33%，加拿大则更多，占到45%，我国每年发生的此类中毒事件也非常多。 引发病症 金黄色葡萄球菌肠炎是金黄色葡萄球菌引起的，多因原发疾病长期用抗生素引起肠道菌群失调所致，抗生素敏感菌株受到抑制，耐药的金黄色葡萄球菌株趁机繁殖。金黄色葡萄球菌为侵袭性细菌，能产生毒素，对肠道破坏性大，所以金黄色葡萄球菌肠炎起病急，中毒症状严重，主要表现为呕吐、发热、腹泻。呕吐常在发热前出现，发热很高。轻症大便次数稍多，为黄绿色糊状便；重症大便次数频数，每日可达数十次，大便呈暗绿色水样便，外观像海水，所以叫海水样便。粘液多，有腥臭味，有时可排出片状伪膜，将伪膜放入生理水，脱落的肠粘膜即漂在水面上，对诊断帮助很大。体液损失多，患儿脱水、电解质紊乱和酸中毒严重，可发生休克。挑选大便粘液部分涂片，在显微镜下检查可见大量脓细胞，如经革兰氏染色，显微镜检查可见成堆的大量革兰氏阳性球菌。大便培养金黄色葡萄球菌生长，即可明确诊断。 1.方法提要 根据本菌特有的形态及培养物质性，应用Baird Parker平板进行分离，该平板中的氯化锂可抑制革兰氏阴性细菌生长，丙酮酸钠可刺激金黄色葡萄球菌生长，以提高检出率，并利用分解甘露醇和血浆凝固酶等特征，以兹鉴别。 2. 7.5％的氯化钠肉汤 成分：蛋白胨 10g 牛肉膏 3g 氯化钠 75g 蒸馏水 1000ml 制法：将上述成分加热溶解，调pH为7.4，分装，121℃(15 1b)15min高压灭菌。 3.血琼脂培养基 成分：营养琼脂 100ml 脱纤维羊血(或兔血) 10ml 制法：将营养琼脂加热溶化，待冷至50℃左右以 无菌手续加入脱纤维羊血，摇匀，制成平板，置冰箱内备用。 4.甘露醇发酵培养基 成分： 蛋白胨 10g 氯化钠 5g 甘露醇 10g 牛肉膏 5g 0.2％溴麝香草酚蓝溶液 12ml 蒸馏水 1000ml 制法： 将蛋白胨、氯化钠、牛肉膏加到蒸馏水中，加热溶解，调pH7.4，加入甘露醇和指示剂，混匀后分装试管中，115℃(10 1b)20min灭菌备用。 5.兔血浆制备 取3.8％柠檬酸钠溶液〔121℃(15 1b)30min灭菌〕1份加兔全血4份，混匀静置，2000～3000r/min离心3～5min。血球下沉，取上面血浆。 6.设备和材料 6.1显微镜。 6.2 培养箱。 6.3 离心要。 6.4 灭菌吸管：1ml，5ml，10ml。 6.5 灭菌试管。 6.6 载玻片。 6.7 酒精灯。 7.操作步骤 7.1 增菌：取1：10稀释的样品10ml接种到90mlSCDLP液体培养基中(如无此培养基也可用7.5％氯化钠肉汤)，置37℃培养箱， 培养24h。 注：如无此培养基也可用7.5％氯化钠肉汤，检验含防腐剂的化妆品时，可在 1000ml此培养基中加1g卵磷脂、7g吐温80。 7.2分离 自上述增菌培养液中，取1～2接种环，划线接种到血琼脂平板，置37℃培养24～48。在血琼脂平板上菌落呈金黄色，大而突起，圆形，不透明，表面光滑，周围有溶血圈。挑取单个菌落分纯在血琼脂平板上，置37℃培养24H。 7.3 染色镜检 挑取分纯菌落，涂片，进行革兰氏染色，镜检。金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性菌，排列成葡萄状，无芽胞，无夹膜，致病性葡萄球菌，菌体较小，直