桔梗多糖的提取、分离纯化和结构研究-药物分析学专业论文.docxVIP

原创性声明. 例4444N 本人郑重声明:所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研 究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人 或集体已经发表就撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要货献的个人和集 体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。 学位论文作者:章和久地 日期: 10(0年 4 月 8 A 学位论文使用授权声明 本人在导师指导下究成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。 根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部 门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅:本人授权郑州 大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索，可以采用影印、 缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学 位论文戚与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑 州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。 学位论文作者:韩头地 H期: ;010 年中月 2 日 、‘ 摘要 摘要 枯梗 (Platycodon grandiflorum(Jacq.)A.DC.) 作为一种药食两用的中药材， 在我国种植面积广阔。药理研究显示枯梗多糖具有很好的抗肿瘤和增强机体免 疫活性的作用，因此枯梗多糖 (POP) 有很好的研究价值。本文以枯梗为模型， 对桔梗多糖的含量测定、提取工艺、分离纯化、纯度鉴定及结构分析等方面进 行了较系统的研究。现将研究方法与结论分述如下: 1、采用间接法测定桔梗多糖的含量。运用葱酬，硫酸法测定桔梗总糖(包 括多糖和还原性的单糖)的含量，分别采用 3，5-工硝基水杨酸法 (DNS) 、间接 腆最法、菲林滴定法测定还原糖的含嚣。总糖含量与还原糖含景之差即为多糖 的含最。三种方法测得的桔梗多糖的含量分别为 95.55%、96.01%、95.75%。结 果显示三种方法测得的值相近，但是综合实验成本、设备、操作及影响测定的 因素等多方面考虑，选用葱隅，硫酸法与 DNS 法相结合测定桔梗多糖的含最。 2、采用传统的水煮醇沉法提取枯梗多糖，分别考察了提取温度、提取时间、 料液比、提取次数对桔梗多糖提取革的影响，在单因素实验的基础上采用了四 因素三水平正交试验来优化桔梗多糖的提取工艺。正交试验结果表明，枯梗多 糖提取的最佳工艺条件为:提取温度为 80.C ，提取时间为施，提取次数为2 次， 料液比为 1 : 25。通过3 次平行验证实验得出在该方案下桔梗多糖的提取率为 42.51% 。 3、采用Sevag 法、三氯乙酸法、三氯乙酸·正丁醇法 3 种方法分别对桔梗多 糖进行脱蛋白研究，以蛋白脱除率和多糖损失率为衡量指标，结果显示 Sevag 法除蛋白效果较好，其工艺条件为:多糖:氯仿:正丁醇 =25 : 5 : 1，剧烈振摇 2Omino 脱色方法采用日202 氧化法，脱色条件为 t 多糖液: H202叫汀，以浓氮 水或 0.1% NaOH 调 pH 值为 8.8，37.C 保温 12ho 采用 Sephadex 025 柱层析法 脱盘及小分子物质。 4、纯化后的桔梗多糖采用DEAE-纤维素 52 进行分离主要得到三种组分 z POPN 、POPAl.. POPA3o ..=.种组分经过 Sephadex 0100 柱层析进一步分离后均 得到单一对称的洗脱峰。利用 Sephadex 0-100 柱层析、旋光度测定法、紫外分 光光度法对王种多糖进行纯度鉴定得出三种多糖都为均…的多糖，且都不含蛋 11 11 摘要 白质和核酸。利用 S叩hadex G-200 柱居析测得三种多糖的分子量分别为 10233、 4677、234420 5、采用薄层包谱法(TLC) 对枯梗多糖的单糖组成进行了分析， TLC 阁谱 显示 PGPN 的单糖组成中含有果糖，还含有葡葡糖和半乳糖中的…种或者两种 皆寄; PGPAl 是由半乳糖和果糖组成的; PGPA3 是由半乳糖和木糖组成的。眼 光谱显示 PGPN 的单糖是由峡喃糖和毗峭糖共同组成的; PGPAl 的单糖也是由 映喃糖和毗峭糖共间组成的 ;PGPA3 的单糖是由毗喃糖组成的，糖背键类型为 α 型，可能含有 β型糖背键。 1日-NMR 图谱显示 PGPN 的糖背键类型均为盼型， PGPAl 糖背键类型均为 β型; PGPA3 的糖背键类型既有 α 型也有 p 型。 关键词:桔梗多糖提取含量测定分离纯化结构 111 111 Abstract Abstract Platycodon grandiflorum (Jacq.)A.DC. as a traditional Chinese medicine was planted widely in China. I