金属胁迫下中华稻蝗金属硫蛋白分子特性及功能研究-动物学专业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 目 录 中 文 摘 要 I ABSTRACT III 第一章 前言1 1.1 重金属概述1 1.1.1 镉2 1.1.2 铜2 1.1.3 锌3 1.2 金属硫蛋白基因概述3 1.2.1 金属硫蛋白的特点4 1.2.2 金属硫蛋白的生理功能5 1.2.3 金属硫蛋白在昆虫中的研究现状6 1.3 中华稻蝗6 1.3.1 中华稻蝗的生活习性6 1.3.2 中华稻蝗的生活史7 1.4 镉染毒对中华稻蝗的影响及数字基因表达谱（DGE）分析 7 1.5 RNA 干扰应用 8 1.6 研究内容及意义8 1.6.1 研究内容8 1.6.2 研究意义9 1.7 本文创新之处及与所发表论文的相关性9 第二章 中华稻蝗金属硫蛋白基因的分子特性 11 2.1 实验材料 11 2.1.1 供试昆虫 11 2.1.2 相关试剂和仪器 11 2.2 实验方法12 2.2.1 转录组测序的样品制备12 2.2.2 中华稻蝗总 RNA 提取和反转录 12 2.2.3 中华稻蝗金属硫蛋白基因的验证12 2.2.4 引物设计和基因扩增12 2.2.5 转化13 2.2.6 中华稻蝗金属硫蛋白基因的表达14 2.2.7 统计学分析15 2.3 实验结果15 2.3.1 中华稻蝗金属硫蛋白基因的验证15 2.3.2 中华稻蝗金属硫蛋白基因序列的分析17 2.3.3 采用 RT-qPCR 引物及其扩增效率检测 18 2.3.4 MT 基因在中华稻蝗不同发育阶段的表达模式 19 2.3.5 MT 基因在中华稻蝗不同组织部位的表达模式 19 2.4 讨论20 第三章 中华稻蝗金属硫蛋白基因功能研究24 3.1 实验材料24 3.1.1 主要试剂和仪器24 3.2 试验方法25 3.2.1 引物的设计25 3.2.2 体外合成 dsRNA 26 3.2.3 中华稻蝗 MT 基因沉默效率的检测 27 3.2.4 采用 RNAi 技术验证金属硫蛋白基因在中华稻蝗体内的解毒能力 27 3.2.5 制备 CaCl2 感受态细胞 27 3.2.6 构建重组质粒进行 OcMT 异源表达 28 3.2.7 表达 OcMT 融合蛋白的大肠杆菌对金属的耐受能力 29 3.3 实验结果30 3.3.1 中华稻蝗 MT 基因沉默效率 30 3.3.2 中华稻蝗 MT 基因沉默效率后不同浓度重金属的耐受能力 31 3.3.3 中华稻蝗 MT 基因的异源表达 31 3.3.4 OcMT 融合蛋白对重金属镉的耐受性 33 3.4 讨论33 HYPERLINK \l _TOC_250000 第四章 金属急性染毒对中华稻蝗 MT 基因及解毒酶的影响 36 4.1 实验材料36 4.1.1 供试昆虫36 4.1.2 主要药品和仪器36 4.2 实验方法37 4.2.1 三种金属对中华稻蝗半致死浓度测定37 4.2.2 中华稻蝗急性金属处理37 4.2.3 中华稻蝗不同组织的收集37 4.2.4 中华稻蝗体内不同解毒酶酶活测定38 4.2.5 三种金属急性处理后中华稻蝗脂肪体和马氏管的观察38 4.3 实验结果39 4.3.1 三种金属对中华稻