小黑杨花药培养植株转化胆碱氧化酶基因提高耐盐性.pdfVIP

植物学通报Chinese Bulletin of Botany 2008, 25 (1): 8084, w w w .chinbullbotany .com .实验简报. 小黑杨花药培养植株转化胆碱氧化酶基因提高耐盐性 1 1 2 1 1 1* 姜静 , 王雷 , 詹立平 , 王玉成 , 刘桂丰 , 杨传平 1 东北林业大学林木遗传育种与生物技术教育部重点实验室, 林木遗传育种黑龙江省重点实验室, 哈尔滨 150040 2 辽宁中医学院职业技术学院, 沈阳 110 10 1 摘要 以小黑杨(Pop ul us si m o n i i ×P . n i g r a )花药培养植株无菌苗叶片为外植体, 通过根癌农杆菌(A g r o b a cteri um tum efacien s)介导法将胆碱氧化酶基因(co dA )导入小黑杨中, 共获得4 株转化株系, PCR扩增和So ut he rn杂交检测结果全部 呈阳性, 表明codA基因已整合到小黑杨花药培养植株基因组中。荧光定量RT-PC R检测证明, codA基因在小黑杨花药培养植 株中获得表达。耐盐实验结果显示, 各转基因株系在0.6 %的NaC l浓度下能够生长, 而非转基因对照小黑杨受盐害严重, 说明 codA基因的导入提高了转基因植株的耐盐性。 关键词 胆碱氧化酶基因, 小黑杨, 耐盐性 姜静, 王雷, 詹立平, 王玉成, 刘桂丰, 杨传平 (2008). 小黑杨花药培养植株转化胆碱氧化酶基因提高耐盐性. 植物学通报25 , 8084 . 高等植物在盐胁迫下细胞内迅速积累脯氨酸和甜菜 介导法将c odA 基因转入小黑杨花药培养植株, 并检测 碱等渗透保护物质, 进而增强耐盐性, 这是植物逆境生理 转基因植株的耐盐性。 反应的特征之一。在研究过的百余种代谢物中, 甜菜碱 被认为是最好的渗透调节剂, 甜菜碱在植物细胞内的积 1 材料与方法 累使许多代谢中的重要酶类在渗透胁迫下能保持活性 (Mc Cue and Hanson, 1990; 马德钦等, 1995 ; 陈少良 1. 1 材料 等, 200 1; 贾庚祥等, 2002)。因此, 通过转基因技术把 小黑杨(Populus s imonii×P.nigra)花药培养植株是由本 有关甜菜碱合成酶基因导入非耐盐植物基因组中将增强 实验室经花药诱导获得的(刘桂丰等, 2002) 。以M H 附 -1 -1 植物的抗逆性(Nucc io et al . , 1998; S akamot o and . . 加0.5 mg L 6-BA 和0.01 mg L NAA 的培养基为 -1 Murat a, 2000; 沈义国等, 2001; 刘振林和戴思兰, 2004; . 继代培养基, 约20 天继代1 次; 以MH 附加0.5 mg L -1 王春明等, 2004; 刘桂丰等, 2006) . 6-BA 和0.05 mg L N