建立高分辨熔解曲线分析法检测SF3B1基因突变-江苏大学.PDF

第２３卷第１期 江 苏 大 学 学 报（医学 版） Ｖｏｌ．２３ Ｎｏ．１ 　 ２０１３年１月 　 ＪｏｕｒｎａｌｏｆＪｉａｎｇｓｕＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（ＭｅｄｉｃｉｎｅＥｄｉｔｉｏｎ） Ｊａｎ．２０１３ 　 　 　 　 　 　 建立高分辨熔解曲线分析法检测ＳＦ３Ｂ１基因突变 １ １ １ １ １ ２ １ 杨静 ，姚冬明 ，钱军 ，王翠竹 ，杨小飞 ，林江 ，李云 ， １ ２ ２ 陈星星 ，肖高飞 ，马吉春 （江苏大学附属人民医院１．血液科，２．中心实验室，江苏 镇江２１２００２） ［摘要］　目的：建立高分辨熔解曲线分析法（ｈｉｇｈｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎｍｅｌｔｉｎｇａｎａｌｙｓｉｓ，ＨＲＭＡ），检测骨髓增生异常综合征（ｍｙ ｅｌｏｄｙｓｐｌａｓｔｉｃｓｙｎｄｒｏｍｅ，ＭＤＳ）患者中ＳＦ３Ｂ１基因的突变。方法：针对ＳＦ３Ｂ１基因热点突变位点（密码子Ｅ６２２、Ｈ６６２、 Ｋ６６６和Ｋ７００）设计ＰＣＲ扩增引物，建立带有温度内标校准品的ＰＣＲ扩增反应体系，对３０例初诊ＭＤＳ患者的骨髓标 本进行ＰＣＲ扩增，应用ＨＲＭＡ对相应ＰＣＲ产物进行突变检测，并对ＨＲＭＡ检测结果进行ＤＮＡ测序验证。结果：ＨＲ ＭＡ检测发现２例ＭＤＳ患者存在异常的熔解曲线，经ＤＮＡ测序验证１例为Ｋ６６６Ｍ杂合子突变，另１例为Ｋ７００Ｅ杂合 子突变。所建立的ＨＲＭＡ技术检测ＳＦ３Ｂ１基因突变的灵敏度为０．０５（５％）。结论：成功建立检测ＳＦ３Ｂ１基因突变 的ＨＲＭＡ技术，可快速筛查ＭＤＳ标本中的ＳＦ３Ｂ１基因突变。 ［关键词］　高分辨率熔解曲线分析；ＳＦ３Ｂ１；基因突变；骨髓增生异常综合征 ［中图分类号］　Ｒ３９３　　［文献标志码］　Ａ　　［文章编号］　１６７１－７７８３（２０１３）０１－００４９－０４ ＤｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆＳＦ３Ｂ１ｍｕｔａｔｉｏｎｓｕｓｉｎｇｈｉｇｈｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎｍｅｌｔｉｎｇａｎａｌｙｓｉｓ １ １ １ １ １ ＹＡＮＧＪｉｎｇ，ＹＡＯＤｏｎｇｍｉｎｇ，ＱＩＡＮＪｕｎ，ＷＡＮＧＣｕｉｚｈｕ，ＹＡＮＧＸｉａｏｆｅｉ， ２ １ １ ２ ２ ＬＩＮＪｉａｎｇ，ＬＩＹｕｎ，ＣＨＥＮＸｉｎｇｘｉｎｇ，ＸＩＡＯＧａｏｆｅｉ，ＭＡＪｉｃｈｕｎ （１．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＨｅｍａｔｏｌｏｇｙ，２．ＬａｂｏｒａｔｏｒｙＣｅｎｔｅｒ，ｔｈｅＡｆｆｉｌｉａｔｅｄＰｅｏｐｌｅ′ｓＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＪｉａｎｇｓｕＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，ＺｈｅｎｊｉａｎｇＪｉａｎｇｓｕ２１２００２，Ｃｈｉｎａ） ［Ａｂｓｔｒａｃｔ］　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏｅｓｔａｂｌｉｓｈｈｉｇｈｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎｍｅｌｔｉｎｇａｎａｌｙｓｉｓ（ＨＲＭＡ）ａｓｓａｙａｎｄｄｅｔｅｃｔｔｈｅＳＦ３Ｂ１ ｍｕｔａｔｉｏｎｓｉｎｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈｍｙｅｌｏｄｙｓｐｌａｓｔｉｃｓｙｎｄｒｏｍｅ（ＭＤＳ）．Ｍｅｔｈｏｄｓ：ＴｈｅＰＣＲａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｓｙｓｔｅｍｓｗｉｔｈ ｉｎｔｅｒｎａｌｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｃａｌｉｂｒａｔｏｒｓｗｅｒｅｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄｗｉｔｈｓｐｅｃｉｆｉｃＰＣＲｐｒｉｍｅｒｓａｇａｉｎｓｔｆｏｕｒｈｏｔｓｐｏｔｍｕｔａｔｉｏｎ ｓｉｔｅｓｏｆＳＦ３Ｂ１ｇｅｎｅ（Ｅ６２２，Ｈ６６２，Ｋ６６６，ａｎｄＫ７００）．ＴｈｉｒｔｙＭＤＳｓａｍｐｌｅｓｗｅｒｅａｍｐｌｉｆ