基于响应面分析方法的有机磷水解酶全细胞活性表达条件的优化.PDF

DO I :10.15933/j .cnki .1004 -3268.2010.10.002 河南农业科学 1＊ 2 3 黎小军 , 胡军民,林陈水 (1. , 33 8000;2.(), 310021;3. , 3100 32 ) :为了提高有机磷水解酶 (OPH)全细胞活性, 对其表达条件进行了优化。首先采用 Plackett- Burman试验 计对 8 个影响因素进行筛选, 结果表明, 诱导时间 IPTG浓度和诱导温度 3 个因素 对 OPH全细胞活性影响较大。在此基础上采用 Box-Behnken计, 利用 DesignExpert软件进行二 次回归分析,得到该基因工程菌的最佳表达条件为诱导温度 18.86℃, IPTG浓度 0.09 mmol/L,诱导 时间 8.74 h。 OPH全细胞活性的最大预测值为 27.829 U/mL,试验验证值为 27.8 U/mL。 :有机磷水解酶;Plackett-Burman计;Box-Behnken计;响应面法;优化 :Q786　　:A　　:1004 -3268 (2010 )10 -0083-05 ExpressionConditionOptmiizationofWholeCell OPHActivityBasedonSurfaceResponseAnalysis 1 2 3 LIXiao-jun, HUJun-min, LINChen-shui (1.DeparmtentofBiochemistryofXinyuUniversity, Xinyu338000, China; 2.AxygeneBiotechnology(Hangzhou)Limited, Hangzhou31002 1, China; 3.CollegeofPharmaceuticalScienc,eZhejiangUniversityofTechnology, Hangzhou310032, China) Abstrac:tInordertoobtainhighexpressionofwholecellOPHactivity, weoptmiizedtheexpressioncon- ditions.Plackett-Burmandesignwasundertakentoevaluatetheeffectsofeightfactor.sWithstatisticre- gressionanalysi,sthesignificantfactorsaffectingwholecellOPHactivityweredeterminedasfollow:sin- ductiontmi,eIPTGconcentrationandinductiontemperature.Box-Behnkendesignwasusedtooptmiize thesethreecriticalinternalfactor,sanddeterminetheoptmium levelsandtherelationshipsamongthese factor.sByquadraticregressionmodelequationwithDesignExpertstatisticmethod,stheoptmiallevels ofthevariablesweredetermineda:s IPTG-inductiontemperature18.86 ℃, IPTG concentration 0.09 mmol/Landinductiontmie8.74 h.Underthiscondition, thepredictedwholecell