2018细胞电镜冷冻制样及成像高级培训班-中国科学院生物物理研究.PDF

2018 细胞电镜冷冻制样及成 像高级培训班 培训手册 2018 年7 月2 日-6 日北京 目录 Part1 会议日程 1 Day1: 7 月2 日 1 Day2-5: 7 月3-6 日 2 （一）上机实习 2 （二）讨论答疑 3 （三）学员分组 4 Part2 技术方法 5 1.高压冷冻和冷冻替代工作流程 5 1.1Leica EM ICE 高压冷冻仪 5 1.2Leica EM AFS2 冷冻替代仪 5 2.冷冻断裂复型工作流程 8 2.1 冷冻 8 2.2 转移 8 2.3 断裂 8 2.4 蚀刻 8 2.5 镀膜 8 2.6 转移 8 2.7 观察 8 3.冷冻离子减薄-FIB 工作流程 9 3.1 冷冻样品制备 9 3.2 冷冻离子减薄 9 3.3 冷冻电镜成像 10 3.4 数据分析及三维重构 11 4.AutoCUTS-SEM 工作流程 12 4.1 样品制备 12 4.2 连续切片及自动收集 14 4.3 建立连续切片库 16 4.4 图像数据采集 17 4.5 图像数据处理 21 I 4.6 三维重构及数据分析 21 5. 电子断层扫描三维重构的数据收集流程 22 5.1 寻找需要进行数据收集的区域 22 5.2 确定数据收集的参数 22 5.3 参数设定 22 5.4 利用image shift 设定focus 和tracking 位置 23 5.5 使用物镜电流聚焦进行聚焦 23 5.6 收集数据 23 6.数据处理流程 24 6.1 有胶体金数据处理流程 24 6.2 无胶体金数据处理流程 25 7.参考文献推荐 27 7.1 高压冷冻和冷冻替代部分 27 7.2 冷冻断裂复型部分 27 7.3 冷冻离子减薄-FIB 部分 27 7.4 AutoCUTS-SEM 部分 27 7.5 电子断层扫描三维重构的数据收集部分 28 7.6 数据处理部分 28 Part3 培训教室分布图 29 生物物理所地图 29 7#培训教室分布图 30 8-9#培训教室分布图 31 Part4 参会学员名录 32 Part5 备忘录 34 II 2018 细胞电镜冷冻制样及成像高级培训班-会议日程 Part1 会议日程 Day1: 7 月2 日 报告安排 地点：中科院生物物理所9501 上午日程 （主持人：孙 磊） 孙 飞 研究员 8:30-8:35 开场致辞 ( 中科院生物物理所) 三维电镜技术与构造生物学 8:35-9:25