第四章固定化酶是和固定化细胞.pptVIP

第四章 固定化酶和固定化细胞 （2学时）;游离酶的使用;1 固定化酶的定义与优点;固定化酶的优点：;2 酶固定化技术发展史 ;目前，固定化技术已经取得了许多重要成果，充分发挥了固定化酶和固定化细胞在改革工艺和降低成本方面的巨大潜力。 但从目前的发展状况来看，尽管酶种类繁多，但已经固定化的酶却相对有限，采用固定化酶技术大规模生产的企业尚属少数，真正在工业上使用的固定化酶还仅限于葡萄糖异构酶、葡萄糖氧化酶和青霉素酰化酶等为数不多的十几个酶种，故仍需大力研究开发使更多的固定化酶和细胞能适用于工业规模生产。;3 固定化酶的制备方法;在具体选择时，一般应遵循以下6个原则。 ;3.1吸附法;物理吸附法是通过物理方法将酶直接吸附在水不溶性载体表面上而使酶固定化的方法。是制备固定化酶最早采用的方法。 常用的载体：纤维素、胶原、淀粉及面筋、活???炭、氧化铝、皂土、多孔玻璃、硅胶、二氧化钛、羟基磷灰石等。 优点：操作简单、价廉、条件温和，载体可反复使用，酶与载体结合后，活性部位及空间构象变化不大，固定化酶活力较高。 缺点：酶和载体结合不牢固，在使用过程中容易脱落，常与交联法结合使用。;离子吸附法(ion adsorption)是将酶与含有离子交换基团的水不溶性载体以静电作用力相结合的固定化方法，即通过离子键使酶与载体相结合的固定化方法。 DEAE-纤维素吸附的α-淀粉酶、蔗糖酶已作为商品固定化酶。 具有操作简便、条件温和、酶活力不易丧失等优点。此外，吸附过程同时可以纯化酶。;3.2包埋法;（1）凝胶包埋法 ;（2）微胶囊包埋法 ;3.3共价键结合法;其中最普遍的共价键结合基团是氨基、羧基以及苯环。常用来和酶共价偶联的载体的功能基团有芳香氨基、羟基、羧基和羧甲基等。这种方法是固定化酶研究中最活跃的一大类方法， 但必须注意，参加共价结合的氨基酸残基应当是酶催化活性非必需基团，如若共价结合包括了酶活性中心有关的基团，会导致酶的活力损失。;用共价键结合法制备的固定化酶，酶和载体之间都是通过化学反应以共价键偶联。由于共价键的键能高，酶和载体之间的结合相当牢固，即使用高浓度底物溶液或盐溶液，也不会使酶分子从载体上脱落下来，具有酶稳定性好、可连续使用较长时间的优点。 但是采用该方法时，载体活化的难度较大，操作复杂，反应条件较剧烈，制备过程中酶直接参与化学反应，易引起酶蛋白空间构象变化，酶活回收率一般为30%左右，甚至酶的底物的专一性等性质也会发生变化，往往需要严格控制操作条件才能获得活力较高的固定化酶。 ;3.4交联法;以上四种固定化酶方法各有其优缺点（见表4-1）。往往一种酶可以用不同方法固定化，但没有一种固定化方法可以普遍地适用于每一种酶。在实际应用时，常将两种或数种固定化方法并用，以取长补短。;4 固定化酶的特性;4.1固定化酶的形状;4.2酶活力;4.3固定化酶的稳定性 ;4.4固定化酶的反应特性;（1）底物特异性;（2）反应的最适pH;（3）反应的最适温度 ;（4）米氏常数;（5）最大反应速度 ;5 固定化活细胞;固定化细胞的优点和缺点：; 6 酶催化反应器及其类型;6.1酶反应器的类型; 6.2反应器的结构特点 ;这类反应器结构简单，造价较低，传质阻力很小，反应能迅速达到稳态，主要应用在饮料等食品工业中。 其缺点是操作麻烦，在反复回收过程中固定化酶容易损失，所以工业规模的固定化酶很少采用。但是，常用于游离酶。;这种反应器在运转过程中，底物以恒定的流速流入反应器，与此同时，反应液则以同样的流速流出反应器。反应桶内装有搅拌器，使反应组分与固定化酶颗粒混合均一，出口处有过滤膜，可使不断补充新鲜底物与反应液流量维持动态平衡，如图4-3。;6.2.3 填充床反应器;6.2.4 流化床反应器;6.2.5 连续搅拌桶-超滤反应器(CSTR／UF);6.2.6 循环反应器（Recycle Reactor，RCR）; 6.3膜式反应器;（1）螺旋卷膜式反应器 ;（2）中空纤维膜式反应器;6.3.2 膜式反应器的特点;但是膜反应器在使用过程中也存在着一些问题，这些问题严重制约了膜反应器的推广应用： 膜孔分布与形态结构的均一性差，造成酶分子和小分子激活剂(金属离子或辅助因子等)的泄漏损失。 酶在膜表面的随机吸附引起酶空间构型的改变或活性位点的遮蔽，降低或破坏酶的催化活性。 酶分子在酶膜反应器中容易因湍流等原因而发生剪切失活。 有些情形下，由于产物分子在靠近膜面的位置逐渐积聚而形成凝胶层，造成酶膜反应器中严重的产物抑制。 浓差极化和膜污染使酶膜反应器的传质速率和生产能力急剧下降，膜孔堵塞、膜厚增加使膜的结构形态发生不利变化，膜需要频繁地清洗或更换。;6.3.3 膜式反应器的??用;本章重点：