柑桔SRAP和ISSR分子标记技术体系的建立与优化.PDFVIP

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2019-02-26 发布于四川
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柑桔SRAP和ISSR分子标记技术体系的建立与优化.PDF

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分子植物育种，2008年，第6卷，第1期，第170-176页 MolecularPlantBreeding,2008,Vol.6,No.1,170-176 新思路、新技术、新方法 NovelThinkingTechnology 柑桔SRAP和ISSR分子标记技术体系的建立与优化 1,2,3 2,3 2,3 2,3 2,3 2,3 2,3* 吴鑫雷天刚何永睿刘小丰许兰珍彭爱红陈善春 1西南大学园艺园林学院,重庆,400716;2西南大学柑桔研究所,重庆,400712;3国家柑桔品种改良中心,重庆,400712 *通讯作者,scchen2004@ 摘要 2+ 通过对PCR反应程序、反应体系(DNA模板量、PCR反应体积、Mg浓度、dNTP浓度、酶用量、引 Taq 物量)、电泳检测方法的系统优化，建立了柑桔SRAP-PCR和ISSR-PCR体系；以此进行大规模引物筛选，从而建立了柑桔SRAP和ISSR分子标记技术体系。SRAP-PCR：25L体系，模板DNA25ng，Tris-HCl10mmol/L， μ 2+ KCl50mmol/L，Mg 1.2mmol/L，dNTP120 mol/L，酶 1.5U，引物0.4 mol/L，反应程序为94℃预变性 μ Taq μ 5min，35个循环(94℃30s，47℃1min，72℃1min)，72℃延伸10min；ISSR-PCR：25 L体系，模板DNA25ng， μ 2+ Tris-HCl10mmol/L，KCl50mmol/L，Mg 1.6mmol/L，dNTP200 mol/L，酶1U，引物0.8 mol/L。筛选 μ Taq μ 出稳定性好、多态性高的24对SRAP引物和13条ISSR引物。关键词柑桔,SRAP,ISSR,建立,优化 EstablishmentandOptimizationofSRAPandISSRMarkerSysteminCitrus 1,2,3 2,3 2,3 2,3 2,3 2,3 2,3* WuXin LeiTiangang HeYongrui LiuXiaofeng XuLanzhen PengAihong ChenShanchun 1CollegeofHorticultureLandscapeDesigning,SouthwestUniversity,Chongqing,400716;2CitrusResearchInstitute,SouthwestUniversity, Chongqing,400712;3NationalCitrusCultivarImprovementCenterofChina,Chongqing,400712 *Correspondingauthor,scchen2004@ AbstractHerewehaveestablishedSRAP-PCRandISSR-PCRsysteminCitrusbyoptimizationofPCRreaction 2+ program,reactionsystem (templateDNA,reactionvolume,Mg,dNTP, DNApolymeraseandprimer)and