优化海兔肝蛋白质组提取与分离技术.PDFVIP

第 45卷 　增刊 厦 门大学学报 ( 自然科学版 ) Vo l. 45　Sup. 2006年 5月 　　　　　　　　　　Jou rnal of X iam en U n iversity (N atu ral Science) 　　　　　　　 　　 M ay 2006 优化海兔肝蛋白质组提取与分离技术 李志丹 , 包晓东 , 黄慧英 , 黄河清 (厦门大学生命科学学院 生物化学与生物技术学系 ,福建 厦门 36 1005) 摘要 :为了提高海兔肝脏蛋白质组的提取及研究效率 ,本文描述和比较了 3种提取海兔肝脏蛋白质组的方法 :裂解液浸 泡 - 超速离心 ,丙酮 - TCA 沉淀 - 裂解液浸泡 ,裂解液浸泡 - 丙酮 - TCA - 裂解液溶解. 然后采用常规 SD SPA GE双向 电泳对提取出的蛋白质进行检验 ,用 M elan ie 4 Trial软件分析电泳图谱 ,通过对蛋白质分辨率和斑点总数的比较 ,选出一 种更适合海兔肝蛋白质的提取方法. 结果表明采用丙酮 - TCA 沉淀 - 裂解液浸泡法提取海兔肝蛋白质所得的双向电泳 图谱不论从蛋白质斑点分辨率还是总数上都优于其他两种方法 ,更适合提取分离海兔肝脏蛋白质. 关键词 :海兔肝 ; SD SPA GE双向电泳 ;提取与分离 ;优化分离 ;蛋白质组 中图分类号 : Q 51　　　　　文献标识码 :A 　　　　　文章编号 :(2006) S0 194 04 ( ) 　　海兔 Ap ly s ia 系杂食性动物 ,属软体动物门腹足 1. 1　材料与试剂 ( ) ( ) 纲 Ga stropoda 后腮亚纲 Op ishob ranch ia 海 兔科 NLCS取材于厦门浅海区域. 分离海兔肝蛋 白质 ( ) Ap lysiidae 动物 ,广泛分布在热带及亚热带海域 , 以 组所需要的试剂和配方参考常规的 SD SPA GE双向电 底栖矽藻和沉积在海滩上的有机质 、绿藻和底栖桡足 [ 2 , 3 ] 泳技术 ,但进行适当优化. 类等为食. 海兔系雌雄同体的海洋软体动物 ,它在我国 丙烯酰胺 、甲叉丙烯酰胺 、三羟 甲基氨基 甲烷 福建 、广东、山东等省的海域均有分布. 厦门最常见的 ( ) ( ) ( ) Tris 、二硫苏糖醇 D TT 、超纯尿素 u rea 、NON ID E ( 海兔品种是蓝斑背肛海兔 N ota rchus leach ii cirrosus TP40 (N P40) 、CHA PS均购 自上海生工 ;载体两性电 ) S tim pson , NLCS . 现在海兔已经成为生物研究的一种 ( )