蛋白表达、分离和纯化.doc

蛋白质的表达、分离、纯化和鉴定 来源： HYPERLINK 易生物实验 浏览次数：2704 HYPERLINK /comment/?keyid=phpcms-content-title-4468verify=86de8f67f98f1d2bc0f73c 网友评论 0 条 第一部分 蛋白质的表达、分离、纯化 克隆基因在细胞中表达对理论研究和实验应用都具有重要的意义。通过表达能探索和研究基因的功能以及基因表达调控的机理，同时克隆基因表达出所编码的蛋白质可供作结构与功能的研究。第二部分 蛋白质的鉴定 电泳可用于分离复杂的蛋白质混合物，研究蛋白质的亚基组成等。在聚丙烯酰胺凝胶电泳中，凝胶的孔径，蛋白质的电荷，大小，性质等因素共同决定了蛋白质的电泳迁移率。 关键词： HYPERLINK /tag.php?tag=%B5%B0%B0%D7%D6%CA 蛋白质 HYPERLINK /tag.php?tag=%B5%B0%B0%D7%D6%CA%B1%ED%B4%EF 蛋白质表达 HYPERLINK /tag.php?tag=%BF%CB%C2%A1%BB%F9%D2%F2 克隆基因 HYPERLINK /tag.php?tag=%BE%DB%B1%FB%CF%A9%F5%A3%B0%B7%C4%FD%BD%BA%B5%E7%D3%BE 聚丙烯酰胺凝胶电泳 HYPERLINK /tag.php?tag=%C2%C8%C3%B9%CB%D8%F5%A3%BB%F9%D7%AA%D2%C6%C3%B8 氯霉素酰基转移酶 HYPERLINK /tag.php?tag=%CA%AE%B6%FE%CD%E9%BB%F9%C1%F2%CB%E1%C4%C6 十二烷基硫酸钠 HYPERLINK /tag.php?tag=SDS%BE%DB%B1%FB%CF%A9%F5%A3%B0%B7%C4%FD%BD%BA SDS聚丙烯酰胺凝胶 第一部分 蛋白质的表达、分离、纯化 目的要求 （1）了解克隆基因表达的方法和意义。 （2）了解重组蛋白亲和层析分离纯化的方法。 实验原理 克隆基因在细胞中表达对理论研究和实验应用都具有重要的意义。通过表达能探索和研究基因的功能以及基因表达调控的机理，同时克隆基因表达出所编码的蛋白质可供作结构与功能的研究。大肠杆菌是目前应用最广泛的蛋白质表达系统，其表达外源基因产物的水平远高于其它基因表达系统，表达的目的蛋白量甚至能超过细菌 HYPERLINK /yp/product-list-428.html \t _blank 总蛋白量的80%。本实验中，携带有目标蛋白基因的质粒在大肠杆菌BL21中，在 37℃，IPTG诱导下，超量表达携带有6个连续组氨酸残基的重组氯霉素酰基 HYPERLINK /yp/product-list-483.html \t _blank 转移酶蛋白，该蛋白可用一种通过共价偶连的次氨基三乙酸（NTA）使镍离子（Ni2+）固相化的层析介质加以提纯，实为金属熬合亲和层析（MCAC）。蛋白质的纯化程度可通过聚丙烯酰胺凝胶电泳进行分析。 试剂和器材 一、试剂 [1] LB液体培养基：Trytone 10g, yeast extract 5g, NaCl 10g, 用 HYPERLINK /yp/product-list-67.html \t _blank 蒸馏水配至1000mL. [2] 氨苄青霉素：100mg/mL [3] 上样 缓冲液：100 mM NaH2PO4, 10 mM HYPERLINK /yp/product-list-702.html \t _blank Tris, 8M Urea, 10 mM2-ME, pH8.0 [4] Washing Buffer：100 mM NaH2PO4, 10 mM HYPERLINK /yp/product-list-702.html \t _blank Tris, 8 M Urea, pH6.3 [5] Elution Buffer:100 mM NaH2PO4, 10 mMTris, 8M Urea, 500 mM Imidazole, pH8.0 [6] IPTG 易生物仪器库： HYPERLINK /yp/product-list-42.html \t _blank /yp/product-list-42.html易生物试剂库： HYPERLINK /yp/product-list-43.html \t _blank /yp/product-list-43.html 二、器材 HYPERLINK /yp/product-list-339.html \t _blank 摇床， HYPERLINK /yp/product-list-47.