蛇床子素在局部脑缺血再灌注损伤中的作用研究-河北北方学院.DOC

PAGE PAGE 1 附件：2015年申报河北省科技进步奖公示材料 项目名称：蛇床子素在局部脑缺血再灌注损伤 中的作用研究 主要完成单位：河北北方学院 推荐单位：河北省卫生和计划生育委员会 申报奖种：科技进步奖 项目简介： 缺血性脑血管疾病（ischemic cerebrovascular disease，ICVD）是一类由于脑部供血障碍引起脑组织相应区域缺血、低氧，造成脑组织破坏所出现一系列生化代谢异常、生理功能丧失、病理形态改变等的疾病，包括短暂性脑缺血发作、脑栓塞、脑血栓等。占脑血管疾病的80%~85%，是一种发病率、致残率、致死率高，严重危害人类健康的疾病。目前超早期溶栓治疗是惟一经循证医学证实的有效药物治疗方法，但由于其治疗时间窗过窄，只有3h，极大限制了它的应用。抗血小板聚集、抗凝治疗虽已应用多年，但其安全性及长期疗效仍存在一些争议。神经保护剂被认为是最有前途治疗脑缺血性损伤的药物，其治疗目的在于减轻缺血后的细胞损害，延迟神经细胞死亡。 蛇床子素(osthole，Ost)， 7-甲氧基-8-异戊烯基-香豆素，传统中药蛇床子的组成成分，具有多种的药理作用，包括抗氧化、抗炎、抗肿瘤、抗血小板、雌激素样和抗疼痛等作用，目前已在临床上用于治疗皮肤病和性病多年。我们多年来一直从事蛇床子素中枢神经保护作用的研究，研究表明蛇床子素能够透过血脑屏障，通过抑制中枢胆碱酯酶活性、增强中枢抗氧化酶活性、清除脑内自由基等作用而具有改善痴呆模型（包括血管性和老年性）动物的认知障碍，且毒副作用小，有望成为预防和治疗中枢神经系统疾病的有效药物。基于以上研究背景，本课题研究了蛇床子素对包括脑缺血再灌注损伤为主的各种认知障碍模型的学习记忆各环节、体外抗氧化能力、海马长时程增强（long-term potentiation， LTP）的影响，脑内凋亡相关蛋白、中枢氨基酸类神经递质、NO及NOS含量变化的影响，以及相关脑组织细胞的病理进程及脑海马细胞周期变化等的影响。课题从多个角度证实了蛇床子素在脑缺血再灌注损伤中的神经保护作用及其机制，为其作为神经保护剂应用临床提供了大量的真实可靠的实验技术资料。 另外，蛇床子素在水中的溶解度低、性质不稳定、直接用药对胃肠有刺激作用，临床主要以外用为主，限制了其神经保护剂的临床应用。前期我们对蛇床子素的药效学、药代学研究都是将蛇床子素溶解在 N，N-二甲基甲酰胺(DMF)中，DME为有机溶剂，具有一定毒性，只能低浓度、少量应用于动物实验研究，不能应用于临床。因此本课题进一步对蛇床子素新剂型进行探索，研究蛇床子素滴丸及分散片的最佳制备工艺，并对其进行溶出度考察，获得了可用于临床的蛇床子素新剂型的制备方法，为蛇床子素作为脑缺血再灌注损伤的神经保护剂应用于临床提供药剂学的技术支持，同时也为其它由于吸收问题限制临床应用的药物提供了可参考的药剂学上的研究思路。 关键技术与创新点： 1. 率先在国内外利用在体细胞外电生理学实验技术研究蛇床子素对突触可塑性的影响，第一次从细胞突触水平证实蛇床子素改善模型动物认知障碍的神经保护作用。 2. 率先在国内外研究蛇床子素滴丸及分散片的最佳制备工艺，并对其进行溶出度考察，并在临床制剂学上推广应用，为其更好地作为神经保护药物应用于临床，打下了坚实的基础。蛇床子素分散片及滴丸制备工艺的考察，没有文献可以参考，只能根据“药典”要求制备，制备过程中一些指标的确立需要反复实验才能获得，实验技术具有一定的难度。 3. 整体动物记录海马LTP电生理学实验方法，是本课题难度较大的实验技术，电极定位和PS幅值的记录具有一定难度，目前国内能开展此技术的实验室并不多见。我们对此项技术进行优化和创新，使其更容易操作，同时我们已将此项技术推广多家研究所应用，为神经电生理学研究实验技术手段的提高做出贡献。 3. 多模型多角度研究同一问题是本课题研究思路的创新点：课题利用多种认知障碍模型，血管性痴呆（脑缺血再灌注损伤）及老年性痴呆（阿尔茨海默病），在行为学上同时验证了蛇床子素改善痴呆模型动物学习记忆障碍的神经保护作用，并系统地比较对两种模型神经保护作用的差异。国内大多数研究通常只会选择一种模型进行研究，我们的研究结果更全面、更具有说服力。 4. 第一次从中枢Glu/GABA学习记忆调控系统入手，研究蛇床子素的神经保护作用：课题采用柱前衍生化高效液相色谱紫外检测法，首次观察蛇床子素对Aβ25-35诱导的阿尔茨海默病大鼠海马中氨基酸递质水平变化，结果表明蛇床子素能够抑制Glu的兴奋性毒性，对中枢神经元具有保护作用。 5. 在国内外率先利用多种实验技术方法，如HE染色、TUNEL染色、免疫组化染色等，证明蛇床子素在脑缺血后通过抑制神经元凋亡而具有神经保护作用。 6.