小鼠肠道RegⅢγ蛋白间接免疫荧光检测方法的建立.PDF

　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 　　　　２０１６（０４上）：２２０－２２３ 小鼠肠道Ｒｅｇ 蛋白间接免疫荧光 Ⅲγ 检测方法的建立 １ ２ １ １ ２ １ 王玉茹 ，李国江 ，王春凤 ，杨桂连 ，沙万里 ，钱爱东 （１．吉林农业大学 动物科学技术学院／吉林省动物微生态制剂工程研究中心，长春 １３０１１８； ２．吉林农业科技学院，吉林 吉林 １３２１０１） 中图分类号：Ｓ８５２．４ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００４－７０３４（２０１６）０４－０２２０－０５ 关键词：小鼠；肠道；Ｒｅｇ ；间接免疫荧光；检测 Ⅲγ 摘　要：为了建立肠道Ｒｅｇ 蛋白免疫荧光检测方法，试验探索及优化不同柠檬酸缓冲液抗原热修 Ⅲγ 复时间，一抗、二抗浓度，建立间接免疫荧光检测小鼠肠道Ｒｅｇ 方法。结果表明：抗原修复最佳时 Ⅲγ 间为１５ｍｉｎ，一抗、二抗最适稀释度分别为１∶５００，１∶３００。说明此方法针对Ｒｅｇ 蛋白检测具有特异 Ⅲγ 性强、组织破坏率低、荧光效果好的特点，可为Ｒｅｇ 蛋白在肠道中的定位和动态分布提供有效试 Ⅲγ 验检测条件。 ＥｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔｏｆｉｎｄｉｒｅｃｔｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｍｅｔｈｏｄｆｏｒｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆＲｅｇＩＩＩ γ ｐｒｏｔｅｉｎｉｎｔｈｅｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｔｒａｃｔｏｆｍｉｃｅ １ ２ １ １ ２ １ ＷＡＮＧＹｕｒｕ，ＬＩＧｕｏｊｉａｎｇ，ＷＡＮＧＣｈｕｎｆｅｎｇ，ＹＡＮＧＧｕｉｌｉａｎ，ＳＨＡＷａｎｌｉ，ＱＩＡＮＡｉｄｏｎｇ （１．ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＡｎｉｍａｌＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ／ＪｉｌｉｎＰｒｏｖｉｎｃｉａｌＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇＲｅｓｅａｒｃｈＣｅｎｔｅｒｏｆＡｎｉｍａｌｐｒｏｂｉｏｔｉｃｓ，Ｊｉｌｉｎ ＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈａｎｇｃｈｕｎ１３０１１８，Ｃｈｉｎａ；２．ＪｉｌｉｎＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｊｉｌｉｎ１３２１０１，Ｃｈｉｎａ） Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｍｏｕｓｅ；ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｔｒａｃｔ；Ｒｅｇ ；ｉｎｄｉｒｅｃｔｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ；ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ⅲγ Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＴｏｅｓｔａｂｌｉｓｈａｎｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｍｅｔｈｏｄｆｏｒｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆＲｅｇ ｐｒｏｔｅｉｎｉｎｔｈｅｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｔｒａｃｔ，ｔｈｅｔｉｍｅｆｏｒｔｈｅｒｍａｌｒｅｐａｉｒｏｆ Ⅲγ ａｎｔｉｇｅｎｓｉｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｃｉｔｒａｔｅｂｕｆｆｅｒｓｏｌｕｔｉｏｎｓａｎｄｔｈｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓｏｆｐｒｉｍａｒｙａｎｔｉｂｏｄｙａｎｄｓｅｃｏｎｄａｎｔｉｂｏｄｙｗｅｒｅｅｘｐｌｏｒｅｄａｎｄｏｐｔｉｍｉｚｅｄｔｏｅｓｔａｂ ｌｉｓｈａｎｉｎｄｉｒｅｃｔｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｍｅｔｈｏｄｆｏｒｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆＲｅｇ ｐｒｏｔｅｉｎｉ