重组精氨酸脱亚胺酶的制备工艺-重庆理工大学学报.PDF

第３０卷　第４期 重 庆 理 工 大 学 学报（自然科学） ２０１６年４月 Ｖｏｌ．３０　　Ｎｏ．４ ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｏｎｇｑｉｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（ＮａｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅ） Ａｐｒ．２０１６  ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７４－８４２５（ｚ）．２０１６．０４．０１３ 重组精氨酸脱亚胺酶的制备工艺 １ １ ２ 何云凤 ，郭晋霞 ，范　开 （１．重庆理工大学 药学与生物工程学院，重庆　４０００５４； ２．重庆富进生物医药有限公司，重庆　４０００５０） 摘　　　要：研究了重组精氨酸脱亚胺酶（ｒＡＤＩＥＳ）的３０Ｌ规模发酵、制备工艺及其生物学活 性。将构建好的工程菌先进行摇瓶活化获得种子液，转入３０Ｌ发酵罐进行培养，用ＩＰＴＧ进行 诱导表达；表达产物进行高压匀浆破菌、包涵体洗涤、溶解稀释复性后经ＤＥＡＥ阴离子交换层析 柱和Ｂｕｔｙｌ疏水层析柱纯化；通过 ＳＤＳＰＡＧＥ和ＲＰＨＰＬＣ等方法检测表达和纯度；用体外测活 法检测活性。将工程菌进行放大培养并诱导表达，获得了相对分子质量在４６ｋＤａ的ｒＡＤＩＥＳ。 重组蛋白表达量占总蛋白的２５％以上，经制备工艺获得的ｒＡＤＩＥＳ纯度高于９５％，酶活性为４２ ＩＵ。实验结果表明：该工艺具有可行性，可以获得较高活性的重组精氨酸脱亚胺酶。 关　键　词：精氨酸脱亚胺酶；发酵；复性；分离纯化 中图分类号：Ｑ３４４１．１３　　　　文献标识码：Ａ 文章编号：１６７４－８４２５（２０１６）０４－００７３－０６ ＳｔｕｄｙｏｆＰｒｅｐａｒａｔｉｏｎＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙｏｆＲｅｃｏｍｂｉｎａｎｔＡｒｇｉｎｉｎｅＤｅｉｍｉｎａｓｅ １ ２ ２ ＨＥＹｕｎｆｅｎｇ，ＧＵＯＪｉｎｘｉａ，ＦＡＮＫａｉ （１．ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＰｈａｒｍａｃｙａｎｄＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，ＣｈｏｎｇｑｉｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ４０００５４，Ｃｈｉｎａ；２．ＦａｇｅｎＴｅｃｈｅｎｏｌｏｇｙＩｎｃ．，Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ４０００５０，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ３０Ｌ ｓｃａｌｅｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ，ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙａｎｄｂｉｏｌｏｇｉｃａｌａｃｔｉｖｉｔｉｅｓｏｆ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔａｒｇｉｎｉｎｅｄｅｉｍｉｎａｓｅ（ｒＡＤＩＥＳ）ｗｅｒｅｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄ．Ｔｈｅｓｅｅｄｓｏｌｕｔｉｏｎｗａｓｏｂｔａｉｎｅｄｂｙ ｓｈａｋｉｎｇｆｌａｓｋａｃｔｉｖａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇｂａｃｔｅｒｉａ，ａｎｄｔｈｅｎｔｒａｎｓｆｅｒｒｅｄｉｔｔｏ３０Ｌ ｆｅｒｍｅｎｔｅｒｆｏｒｅｎｌａｒｇｉｎｇｃｕｌｔｉｖａｔｉｏｎ，ａｎｄＩＰＴＧｗａｓｕｓｅｄｆｏｒｉｔｓｉｎｄｕｃｔｉｏｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ．Ｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｐｒｏｄｕｃｔｓｂｒｏｋｅｂａｃｔｅｒｉｕｍｂｙｈｉｇｈｐｒｅｓｓｕｒｅｈｏｍｏｇｅｎｉｚｅｒ，ａｎｄｉｎｃｌｕｓｉｏｎｂｏｄｉｅｓｗｅｒｅｗａｓｈｅｄｂｙｂｕｆｆｅｒ， ａｎｄａｆｔｅｒｄｉｓｓｏｌｖｅｄｒｅｆｏｌｄｉｎｇ，ｔｈｅｐｒｏｄｕｃｔｗａｓｐｕｒｉｆｉｅｄｗｉｔｈＤＥＡＥａｎｉｏｎｅｘｃｈａｎｇｅｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙａｎｄ Ｂｕｔｙｌｈｙｄｒｏｐｈｏｂｉｃｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙｃｏｌｕｍｎ，ａｎｄｗｅｄｅｔｅｃｔｅｄｉｔｓｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｎｄｐｕｒｉｔｙｂｙ ＳＤＳＰＡＧＥａｎｄＲＰＨＰＬＣａｎａｌｙｓｉｓ．ＴｈｅａｃｔｉｖｉｔｙｏｆｒＡＤＩＥＳｗａｓｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｉ