RAPD及SRAP标记在中国枣属植物系统分类学中的应用研究.pdfVIP

河北农业大学硕士学位(毕业)论文 等(1985)首创的体外酶促合成特异DNA片段的一种方法。它由高温变性、低温退 火、适温延伸等反应组成一个周期，循环进行，使目标DNA得以迅速扩增。其主要 步骤为：置待扩增DNA高温下解链成单链模板，将人工合成的两个寡聚核苷酸引物 在低温条件下分别与目标片段两侧的链互补结合。DNA聚合酶在72℃下将单核苷酸 从引物两端开始掺入，沿模板5’．3’方向延伸，合成的产物均能成为下一次循环的 模板。所以PCR产物是呈指数方式增加的，经25—30个周期后，理论上可增加109 倍，实际上一般可达106-lO7倍。RAPD与PCR相似，它是用随机排列的寡聚核苷酸 单链引物(-K度多为lO个核苷酸)去扩增染色体组中的DNA。若染色体组中的某一 区域恰好与引物互补，则会产生扩增产物，其长度一般在5Kb以内，通过电泳可以 对扩增产物进行分析。来自不同个体的DNA常常产生不同的扩增片段，某一特定的 片段可能会在一个个体中扩增出来，而在另一个个体中扩增不出来，从而表现出多态 性。RAPD的特点是：(1)无需专门设计合成扩增反应的特异性引物使引物具有极 大的探测性。(2)每个RAPD反应中，只需加入一个引物，通过一种引物在两条 DNA互补链上随机互补配对实现扩增反应。(3)为了保证退火反应时双链的稳定性， 引物中的G屺含量应保持在40％以上。在最初的反应周期中，退火温度较低，一般 为36℃。这样一方面保证了核苷酸链引物与模板的稳定配对，另一方面引物碱基随 机排列。而又允许适当的错配，从而扩大引物在基因组DNA中配对的随机性，提高 对基因组DNA分析的效率。与RFLP(Restriction FragmentLength 限制性片段长度多态性)相比，m廿D方法的优点是操作程序简单，迅速，无需同位 素或非同位素标记，只需要极少量的DNA模板，而且制备的DNA的质量不像RFLP 那样要求特别高。 1．2．2 RAPD技术在枣属植物系统学中的应用 高等优点，在植物基因定位、遗传标记、连锁图谱的构建、品种鉴定、分类研究、亲 缘关系等方面得到了广泛应用。到目前为止，应用RAPD技术进行研究的植物已达 100多种，其中包括一些具有经济价值的果树。如苹果、李、桃、杏、梅、柿、柑桔、 葡萄、龙眼、芒果、梨、越桔、樱桃、核桃、香蕉、枣等。 在枣属植物上，刘孟军【2l】用30个引物鉴定了枣和酸枣，还区别金丝小枣和无核 枣这两个形态极相似的品种的近缘关系，说明RAPD不仅可用于枣和酸枣的区别和 鉴定，而且可以用来分析品种(类型)间的亲缘关系。彭建营【J4】用RAPD技术对枣 的种下划分进行了探讨，用37个引物，扩增了429条带，其中多态性带214条，根 据DNA扩增结果计算了品种和类型间的遗传距离，得出变种内遗传差异大于变种间 遗传差异，同为葫芦枣变种的葫芦长红和山东磨盘枣只是果实同有缢痕，葫芦长红和 大马牙相近，属长红枣品种群。山东磨盘枣由圆铃演变而来，属圆铃枣品种群。同样， 同为龙爪枣的河北龙枣和山东龙枣(同物异名)与陕西龙枣的差异较大，所以，枣的 4 RAPD及SRAP标记在中国枣属植物系统分类学中的应用研究 种下不宜设变种，对枣种下的众多品种，可根据品种间的遗传关系，直接划分品种群。 彭建营【丑】从120个引物中筛选出40个多态性引物对64个枣品种进行了扩增，共扩增 此可以进行品种鉴定或早期性状预选。利用DNA扩增结果进行聚类分析，把供试全 部品种分为8类(含七个亚类)。彭建营l玎l还用RAPD技术探讨了永城长红、葫芦长 红、早熟躺枣、河北龙枣、山东龙冬、陕西龙枣几个品种的亲缘关系。彭建营[24J用 终用引物S154找到一个可能与有核性状相关的分子标记。这也是枣中找到的的第一 个与基因连锁的分子标记。赵锦【25J对25个枣品种、品系及其2个近缘种酸枣和毛叶 枣进行了姒PD分析，结果表明毛叶枣与其它枣品种问遗传距离最大，酸枣次之。 毛叶枣与枣是枣属中两个亲缘关系较远的种；而酸枣与枣亲缘关系很近，枣是由酸枣 演化而来的栽培种。刘平[261利用22个多态性引物对赞皇县及周边县的50个赞皇大枣 点。遗传多样性分析表明：赞皇大枣群体的多态性位点小于枣品种群体和酸枣群体； 赞皇大枣群体共扩增出205种带型，而酸枣群体扩增出416种带型；赞争大枣群体内 平均遗传距离小于枣品种群体和酸枣群体。说明：赞阜大枣的遗传多样性小于枣品种 群体，酸枣群体有较丰富