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淫羊矍总黄酮生物转化过程研究 ［摘要］该文旨在研究淫羊翟总黄酮在体外水解酶 作用下的生物转化过程。主要采用蜗牛酶水解淫羊霆总黄 酮，用HPLC测定总黄酮中主要黄酮的转化。数据结果显示 已知主要黄酮成分淫羊痿昔，朝痿定A,朝麓定B,朝蕾定C 都在1?2h内分别完全转化为宝矍昔I ,箭翟昔A,箭麓昔 B和鼠李糖基淫羊蕾次昔II,随着水解时间的延长，各转化 产物被继续水解。因此可得出结论，蜗牛酶在37 °C, pH 6.0 的Hank s平衡盐溶液中，2 h内能将淫羊翟主要总黄酮转 化为次级昔或昔元，且其酶解产物与肠道代谢产物相一致。 ［关键词］淫羊麓总黄酮；蜗牛酶；生物转化 淫羊蕾是传统的补肾中药，具有补肾阳、强筋骨、祛风 湿的作用［1］。淫羊麓中黄酮成分是主要活性成分，其中8- 异戊烯基取代黄酮昔是主要代表活性黄酮，主要有淫羊翟 昔，朝蕾定A,朝翟定B,朝蒼定C和宝蕾昔等［2］,化学结 构见图1。淫羊翟黄酮昔在肠道的吸收较差［3］,水解是淫羊 翟黄酮昔生物转化的起始步骤，去糖基化使得糖昔易于在肠 道扩散和吸收。因此口服淫羊養黄酮，主要以肠道代谢产物 （次级昔或昔元）的形式被吸收而发挥疗效［4-5］,且据文 献报道肠道代谢产物宝翟昔I和淫羊蕾昔元的抗骨质疏松 等的生物活性更强［6-7］ o但由于人体肠道存在的水解酶（肠 道黏膜酶和肠道菌酶）会因人种、年龄、疾病而有所差异 [8-9],因此会影响淫羊麓黄酮昔的水解进而影响其吸收和 疗效的发挥。在体外选择高效安全的淫羊蕾黄酮昔水解酶， 将其加入淫羊麓总黄酮中口服，可以增强淫羊麓总黄酮肠道 水解功能，是促进淫羊蕾总黄酮口服吸收，增加其生物利用 度，提高药效的有效途径之一。 蜗牛酶是从蜗牛的嗦囊和消化道中提取的一种混合酶， 目前已明确其含有纤维素酶、果胶酶、淀粉酶、蛋白酶等20 多种酶，具有很强的生物转化能力[10] o课题组前期研究 表明蜗牛酶可以水解淫羊矍昔[11],且其代谢产物与肠道代 谢产物一致，因此本研究采用蜗牛酶水解淫羊麓总黄酮，研 究主要已知黄酮和未知黄酮的生物转化情况，为构建新型的 淫羊蕾总黄酮仿生酶解给药系统提供前期的研究基础。 1材料 Agilent 1200型高效液相色谱仪（DAD检测器，四元泵, 美国Agilent公司）；数显气浴恒温振荡器（金坛市双捷实 验仪器厂）；METTLER AL204 1/10万天平（瑞士梅特勒-托利 多仪器有限公司）；离心机（长沙湘智离心机仪器有限公司）。 蜗牛酶（上海源叶生物科技有限公司）；淫羊麓昔，朝 蕾定A,朝痿定B,朝麓定C和宝翟昔I对照品（上海源叶 生物科技有限公司，纯度＞98%）；淫羊養昔元对照品（自制, 纯度?98%）；乙月青为色谱纯，水为高纯水，其余试剂均为分 析纯。 淫羊翟购自吉林敦化，经南京中医药大学吴德康教授鉴 定为朝鲜淫羊矍。 2方法与结果 2. 1HPLC测定淫羊麓主要黄酮的分析方法建立 2. 1. 1 色谱条件 Zorbax SBC18 色谱柱(4. 6 mmX 250 mm, 5 um)；流动相乙睛(A)-水(B),梯度洗脱，0?15 min, 10%?25%A, 15?38 min, 25%A, 38?61 min, 25%?71%A, 61 ?75 min, 71%?100%A；流速 1. 0 mL ? min-1；检测波长 270 nm；柱温 30 °C。 2. 1.2对照品溶液的制备 精密称取淫羊痿昔5. 33 mg, 朝翟定A 8. 42 mg,朝霍定B 9. 05 mg,朝霍定C 8. 26 mg, 宝蕾昔I 5. 26 mg,淫羊養昔元8. 19 mg,加无水乙醇溶解稀 释至10 mL,作为储备液。 2.1.3供试品溶液的制备 取转化后的混悬液适量，加无 水乙醇终止酶解反应，摇匀，离心后即得。 2. 1.4标准曲线的绘制精密量取淫羊翟昔，朝餐定A, 朝翟定B,朝翟定C,宝翟昔I和淫羊蕾昔元储备液适量， 加无水乙醇稀释成一定浓度的对照品溶液。所含淫羊養昔的 质量浓度分别为 1? 7, 3.3, 6. 7, 13.3, 26.6, 53.3, 106.6 mg - L-1,所含朝翟定A的质量浓度分别为2. 6, 5.3, 10.5, 21.0, 42. 1, 84.2, 168.4 mg - L-1,所含朝麓定 B 的质量 浓度分别为 1.4, 2.8, 5. 7, 11.3, 22.6, 45.2, 90.5, 181.0 mg - L-1,所含朝蠶定C的质量浓度分别为2.6, 5.2, 10.3, 20.6, 41.2, 82.6, 165.2 mg - L-1,所含宝翟昔 I 的质量 浓度分别为 3. 3, 6.6, 13.2, 26.3, 52.6, 105. 2 mg - L-1, 所含