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溃疡性结肠炎患者免疫紊乱研究和综合护理效果探究 【摘要】目的：分析溃疡性结肠炎患者外周血中 T细胞亚群数量和比例的变化，观察综合护理模式对其疗效 的作用。方法：选择20例UC患者，分离外周血单核细胞 (PBMC),采用流式细胞术(FCM)检测Thl、Th2、Thl7细 胞的数量及Thl/Th2比值，ELISA法测检UC患者综合护护理 前后PBMC培养上清中IFN-Y、ILT7、IL-4细胞因子水平, 用采用综合护理模式观察其效果，与同期选择的健康对照 组比较分析。结果：UC患者综合护理前PBMC中IFN - Y+Thl、 IL-17+Thl7细胞的数量，Thl/Th2比值均高于健康对照组， 差别有统计学意义；综合护理处理后，Thl、Thl7细胞的数 量及Thl/Th2比值的与对照组比较，差别均无统计学意义。 综合护理处理前IFN-y. IL-17水平高于健康对照组，差异 均有统计学意义；综合护理处理后，细胞因子的差异均无 统计学意义。结论：UC患者外周血免疫紊乱在其发病机制中 发挥重要作用，采用综合护理模式可改善其免疫紊乱状态， 有利于患者恢复健康。 【关键词】溃疡性结肠炎；免疫紊乱；综合护理 【中图分类号】R574【文献标识码】A【文章编号】 1004-7484 (2013) 11-0780-02 溃疡性结肠炎(Ulcerative colitis, UC)是一种病因 未明的免疫性疾病。近年来研究表明UC患者T细胞免疫失 衡与其发病机制密切相关[1-2],但其临床治疗效果不佳， 常常影响患者的生活质量。本研究将检测患者外周血的T细 胞亚群的表达和相应的细胞因子水平，并运用综合护理模 式处理UC患者，为UC患者的临床康复寻找新的具有临床意 义的方法。 1材料和方法 1. 1临床资料20例溃疡性结肠炎患者取自本院总部， 男12例，女8例，年龄21?64岁，中位年龄35岁，均符 合UC诊断标准[3], 20例UC病例组，采用综合护理措施处 理10个月以上；正常对照20例取自本院体检部，为健康人 群，排除UC及其它自身免疫性疾病，其中男11例，女9例, 年龄25?61岁，中位年龄33岁。 1.2检测仪器与试剂 小鼠抗人CD4单克隆抗体IgGl、 FITC-抗人IFN-YlgGl/PE-抗人IL-4及同型对照、流式细胞 仪均购自美国BD公司。FITC-抗人IL-17及同型对照IgGl 购自美国Ebioscience公司。佛波酯(PMA)、离子霉素、莫 能菌素购自美国Sigma公司，RPMI1640培养液购自美国 Gibco公司。抗人IL-4 ELISA试剂盒、抗人IFN-Y ELISA 试剂盒购于美国RD公司。抗人IL-17 ELISA试剂盒购于美 国 Ebioscience 公司。 1. 3方法 1. 3. 1淋巴细胞分离与Th细胞亚群测定分别抽取UC 患者组、综合护理处理组和健康对照组外周静脉血5mL,采 用肝素钠抗凝，Ficoll密度梯度离心法分离PBMC,调整 PBMC密度为1X109/L,悬浮于含100 mL/L胎牛血清的 RPMI1640培养液中，同步取lmL细胞悬液，进行细胞内细 胞因子染色，FCM测定Th细胞亚群；取2 mL细胞悬液加入 PMA (50 ng/L).离子霉素(1 umol/L)置于37*孵箱中 培养过夜，收集上清置于-7(TC冻存待ELISA检测。取上 述PBMC悬液(1X109/L)置于48孔培养板内，每孔1 mL, 并加PMA (50 ug/L).离子霉素(1 umol/L)和蛋白转运 抑制剂莫能菌素(2 umol/L)以阻止细胞因子向细胞外分 泌，在371孵箱中培养5 ho收集细胞分为对照管和实验 管，分别加入PercP小鼠抗人CD4 mAb IgGl 10 nL,混 匀，室温放置20 min对细胞表面抗原进行染色。加入 Cytof ix/Cytoperm 液 200 u L, 4°C放置 20 min, 通透和固 定细胞并洗涤后，进行胞内细胞因子染色，实验管分别加 入 IFN- Y mAb IgGl/PE,抗人 IL-4 /FITC, FITC 抗人 IL-17 mAb IgGl各10 uL,对照管加入同型对照抗体，41避光 孵育30 min后，用Perm/Wash液1 mL洗涤2次，最后以 300 UL洗涤液重悬细胞，24 h内采用FCM检测分析。以CD4 直方图设门区分Th细胞(CD4+),最终以散点图IFN-V . IL-4和IL-17染色阳性表示Thl细胞、Th2细胞和Thl7细 胞,用Cellsquest软件获取并分析数据。 1.3.3外周血单核细胞培养上清中IFN-y、 IL-4、 IL-17的检测 取上述冻存PBMC培养上清，采用ELISA法检 测上清中IFN-Y、IL-4、I