真核基因的表达与调控.pptVIP

第八章 真核基因的表达与调控 8.1 真核生物的基因结构与转录活性 8.1.1 基因家族 8.1.2 断裂基因（interrupted gene) 8.1.3 真核生物DNA水平的调控 8.2 真核生物转录机器的主要组成 顺式作用元件和反式作用因子 8.3 蛋白质磷酸化对基因转录的调控 8.4 蛋白质乙酰化对基因表达的影响 8.5 激素与热激蛋白对基因表达的影响 8.6 其他水平的表达调控 真核基因表达调控的最显著特征是能在特定时间和特定的细胞中激活特定的基因，从而实现“预定”的、有序的、不可逆转的分化、发育过程，并使生物的组织和器官在一定的环境条件范围内保持正常功能。 8.1 真核基因的基因结构与转录活性 8.1.1 基因家族 8.1.2 断裂基因（interrupted gene) 8.1.3 真核生物DNA水平的调控 2. 外显子与内含子的连接区 GT—AG法则： 序列分析表明，几乎每个内含子5’端起始的两个碱基都是GT，而3’端最后两个碱基总是AG，由于这两个碱基的高度保守性和广泛性，有人把它称为GT—AG法则，即：5’GT．．．．．．AG 3’。 在鸡成红细胞的核中，珠蛋白基因对DNaseⅠ的降解是敏感的，而编码卵清蛋白的基因是不表达的，它对DNaseⅠ的降解是不敏感的。 相反，在母鸡输卵管细胞的核中，卵清蛋白基因的序列对DNaseⅠ的降解要比珠蛋白基因的序列敏感得多。 转基因小鼠实验表明，当引入一个包含人beta-球蛋白基因和邻近的不含有DnaseI 超敏感位点的片段时，转基因小鼠中仅表达非常低的人的球蛋白mRNA 水平，但当引入球蛋白基因和5‘与3‘超敏感位点在内的片段时，则转基因小鼠中人球蛋白表达水平提高。 说明超敏感位点是正常基因表达所需要的一个重要的转录调控区域。 甲基化达到一定程度时会发生从常规的B-DNA到Z-DNA的转变。 由于Z-DNA结构收缩，螺旋加深，使许多蛋白质因子赖以接合的元件缩入小沟而不利于基因转录的起始。 DNA甲基化与X染色体失活 剂量补偿： 雌性哺乳动物细胞中两条X染色体之一在发育早期随机失活，以确保与只有一条X染色体的雄性个体内X染色体基因的剂量相同。 巴尔小体: 正常女性的细胞核核膜附近有一团高度凝聚的染色质，而在正常男性的细胞核中没有，Barr于1994年首先发现它。因此它命名为巴尔小体（barr body)。 X染色体失活中心（X-chromosome inactivation center, Xic) Xist(xi-specific transcript): 产物为RNA分子，不含ORF，却含有大量终止密码子，因此并不编码蛋白质，而且该RNA分子只存在于细胞核内，不向细胞质转移。 RNA分子能与Xic 位点相互作用，引起后者构象变化，更容易与各种蛋白因子相结合，最终导致X染色体失活。 Xist 基因的表达决定X染色体失活的关键因素 Xist 基因表达调控又是受到何种因素影响呢？ 活性X染色体上的Xist基因总是甲基化的，而失活X染色体上该位点都是去甲基化的。 一般认为，某个蛋白质如果拥有一个或多个成簇的锌指区，那么它就很可能是转录因子。 8.3 蛋白质磷酸化对基因转录的调控 蛋白质的磷酸化与去磷酸化过程是生物体内普遍存在的信息传导调节方式，几乎涉及所有生理及病理过程、如糖代谢、光合作用、细胞的生长发育、神经递质的合成与释放甚至癌变。 细胞表面受体与配体分子的高亲和力特异性结合，能诱导受体蛋白构象变化，或使受体发生寡聚化而被激活，使胞外信号顺利通过质膜进入细胞内。 受体分子活化细胞功能的途径有两条： ① 受体本身或受体结合蛋白具有内源酪氨酸激酶活性，胞外信号通过酪氨酸激酶途径得到传递 受体分子活化细胞功能的途径有两条： ② 配体与细胞表面受体结合，通过G蛋白介导的效应系统产生介质，活化丝氨酸/苏氨酸或酪氨酸激酶，从而传递信号。 8.3.1 受cAMP水平调控的A激酶 A激酶（PKA）： 依赖于cAMP的蛋白激酶称为A激酶(PKA)，它能把ATP分子上的末端磷酸基团加到某个特定蛋白质的丝氨酸或苏氨酸残基上。 非活性状态的PKA全酶由4个亚基R2C2所组成，调节亚基与cAMP相结合，引起构象变化并释放催化亚基，后者随即成为有催化活性的单体。 ●转录因子可以通过cAMP介导的蛋白质磷酸化过程而被激活。 ●在某些分泌细胞，需要几个小时，激活的PKA 进入细胞核，将CRE结合蛋白磷酸化，调节相关基因的表达。 ● CRE（cAMP response element， cAMP应答元件）是DNA上的调节区域。 (TGACGTCA) ● CRE结合蛋