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课件:梅毒的血清学试验.ppt
* * * 梅毒的血清学试验 检验科 李修敏 梅毒的病原学 苍白螺旋体:细长螺旋形,原核微生物,长7-14微米,不易着色,普通显微镜不易看到,可用暗示野显微镜观测到。 人体的免疫学反应 非特异性抗心脂质抗体可用牛心脂质检测出 抗梅毒螺旋体抗体可用梅毒螺旋体检出 梅毒的血清学试验 非螺旋体抗原血清试验(抗原:心磷脂 胆固醇 卵磷脂) 临床意义:初筛 疗效评价 复发及再感染的判断 螺旋体抗原血清试验(抗原:精选的梅毒螺旋体抗原片段) 临床意义: 诊断试验 是否感染过梅毒 无法评价疗效 非螺旋体抗原血清试验 镜下判读结果 性病研究实验室试验(VDRL)Venereal Disease Research Laboratory 非加热血清反应素试验(USR)Unheated Serum Reaging 肉眼判读结果 快速血浆反应素试验(RPR)Rapid Plasma Reaging 甲苯胺红不加热血清试验(TRUST)Toludine Red Unheated Serum Test 试验方法(TRUST) 试剂复温(23℃-29℃) 试剂与血清等量混匀,水平转动8分钟。 结果判断:中等或大的红色凝聚物为阳性反应;较小的红色凝聚物为弱阳性反应;无凝聚物为阴性反应。 存在的问题 ◆假阳性 1、生物学假阳性:见于瘤型麻风、疟疾、系统性红斑狼疮、硬皮病、雅司病、回归热、钩端螺旋体病、血吸虫病、包虫病、旋毛虫病、支原体肺炎、传染性单核细胞增多症、结核病等疾 2、人为因素:试剂与血清反应后放置时间过长,因干燥在纸片上留下假性凝集;没有做阴性对照,肉眼判定错误;标本错误。 ◆假阴性 反应时间不足、反应方式不正确、反应温度不够、前带现象。 螺旋体抗原血清试验 荧光梅毒螺旋体抗体吸收试验(FTA-ABS) 梅毒螺旋体血球凝集试验(TPHA) 梅毒螺旋体被动微粒凝集试验(TPPA) ELISA法梅毒抗体检测 胶体金法梅毒抗体检测 ELISA法梅毒抗体检测 全自动酶免仪、全自动洗板机 半自动酶免仪、半自动洗板机 手工法 操作步骤及原理同其它免疫项目 注意的问题 实验器材的计量(酶免仪、洗板机、恒温箱、冰箱、空调、生物安全柜、精确移液器、量筒、振荡器、温度计) 环境温度:室温(18℃-23℃) 人员培训 样本的要求 实验前试剂的复温 精确的加样:移液器的正确使用 续移液器的使用 吸液的操作 : 1、连接恰当的吸嘴;2、按下控制钮至第一档; 3、将移液器吸嘴垂直进入液面下 1-6mm (视移液器容量大小而定); 0.1-10ul 容量的移液器进入液面下1-2mm 2-200ul 容量的移液器进入液面下 2-3mm 1-5ml 容量的移液器进入液面下 3 -6mm 注:为使测量准确可将吸嘴预洗 3 次,即反复吸排液体 3 次。 4、使控制钮缓慢滑回原位; ---!!!5、移液器移出液面前略等待 1-3 秒; 1000ul 以下停顿 1 秒 5-10ml 停顿 2-3 秒 . 6、缓慢取出吸嘴,确保吸嘴外壁无液体。 续移液器的使用 排液的操作 : 1、将吸嘴以一定角度抵住容量内壁; 2、缓慢将控制钮按至第一档并等待约 1 - 3 秒; 3、将控制钮按至第二档过程中,吸嘴将剩余液体排净; 4、慢放控制钮; 5、按压弹射键弹射出吸嘴。 续移液器的使用 养护: 1、如液体不小心进入活塞室应及时清除污染物; 2、移液器使用完毕后,把移液器量程调至最大值,且将移液器垂直放置在移液器架上; 3、根据使用频率所有的移液器应定期用肥皂水清洗或用 60 %的异丙醇消毒,再用双 蒸水清洗并晾干; 4、避免放在温度较高处以防变形致漏液或不准; 5、发现问题及时找专业人员处理。 注意的问题 加样: 加酶标液: 加底物: 加终止液: 震荡: 盖膜: 洗板: 洗涤液的要求 握板的要求 注意的问题 比色: 孵育时间: 操作时差的问题: 质控问题:内部质控、外部质控 影响ELISA测定结果的干扰因素 外源性干扰因素:溶血、细菌污染、标本保存不当、标本凝集不全、添加剂 内源性干扰因素:RF、补体、嗜异性抗体等 结果解释 图标演示 三种梅毒血清 学试验的结果解释 试验结果 意义 RPR+FTA-ABS+TPPA+ 梅毒 RPR+FTA-ABS-TPPA- 生物学假阳性 RPR-FTA-ABS+TPPA- 极早期梅毒 RPR-FTA-ABS+TPPA+ 治愈梅毒 RPR-FTA-ABS-TPPA- 排除梅毒、AIDS合倂
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