课件：梅毒的血清学试验.ppt

* * * 梅毒的血清学试验 检验科 李修敏 梅毒的病原学 苍白螺旋体：细长螺旋形，原核微生物，长7-14微米，不易着色，普通显微镜不易看到，可用暗示野显微镜观测到。 人体的免疫学反应 非特异性抗心脂质抗体可用牛心脂质检测出 抗梅毒螺旋体抗体可用梅毒螺旋体检出 梅毒的血清学试验 非螺旋体抗原血清试验（抗原：心磷脂 胆固醇 卵磷脂） 临床意义：初筛 疗效评价 复发及再感染的判断 螺旋体抗原血清试验（抗原：精选的梅毒螺旋体抗原片段） 临床意义： 诊断试验 是否感染过梅毒 无法评价疗效 非螺旋体抗原血清试验 镜下判读结果 性病研究实验室试验（VDRL）Venereal Disease Research Laboratory 非加热血清反应素试验（USR）Unheated Serum Reaging 肉眼判读结果 快速血浆反应素试验(RPR)Rapid Plasma Reaging 甲苯胺红不加热血清试验(TRUST)Toludine Red Unheated Serum Test 试验方法（TRUST) 试剂复温（23℃-29℃） 试剂与血清等量混匀，水平转动8分钟。 结果判断：中等或大的红色凝聚物为阳性反应；较小的红色凝聚物为弱阳性反应；无凝聚物为阴性反应。 存在的问题 ◆假阳性 1、生物学假阳性：见于瘤型麻风、疟疾、系统性红斑狼疮、硬皮病、雅司病、回归热、钩端螺旋体病、血吸虫病、包虫病、旋毛虫病、支原体肺炎、传染性单核细胞增多症、结核病等疾 2、人为因素：试剂与血清反应后放置时间过长，因干燥在纸片上留下假性凝集；没有做阴性对照，肉眼判定错误；标本错误。 ◆假阴性 反应时间不足、反应方式不正确、反应温度不够、前带现象。 螺旋体抗原血清试验 荧光梅毒螺旋体抗体吸收试验(FTA-ABS) 梅毒螺旋体血球凝集试验（TPHA) 梅毒螺旋体被动微粒凝集试验(TPPA) ELISA法梅毒抗体检测 胶体金法梅毒抗体检测 ELISA法梅毒抗体检测 全自动酶免仪、全自动洗板机 半自动酶免仪、半自动洗板机 手工法 操作步骤及原理同其它免疫项目 注意的问题 实验器材的计量（酶免仪、洗板机、恒温箱、冰箱、空调、生物安全柜、精确移液器、量筒、振荡器、温度计） 环境温度：室温（18℃-23℃） 人员培训 样本的要求 实验前试剂的复温 精确的加样：移液器的正确使用 续移液器的使用 吸液的操作 : 1、连接恰当的吸嘴；2、按下控制钮至第一档； 3、将移液器吸嘴垂直进入液面下 1-6mm （视移液器容量大小而定）； 0.1-10ul 容量的移液器进入液面下1-2mm 2-200ul 容量的移液器进入液面下 2-3mm 1-5ml 容量的移液器进入液面下 3 -6mm 注：为使测量准确可将吸嘴预洗 3 次，即反复吸排液体 3 次。 4、使控制钮缓慢滑回原位； ---！！！5、移液器移出液面前略等待 1-3 秒； 1000ul 以下停顿 1 秒 5-10ml 停顿 2-3 秒 . 6、缓慢取出吸嘴，确保吸嘴外壁无液体。 续移液器的使用 排液的操作 : 1、将吸嘴以一定角度抵住容量内壁； 2、缓慢将控制钮按至第一档并等待约 1 － 3 秒； 3、将控制钮按至第二档过程中，吸嘴将剩余液体排净； 4、慢放控制钮； 5、按压弹射键弹射出吸嘴。  续移液器的使用 养护： 1、如液体不小心进入活塞室应及时清除污染物； 2、移液器使用完毕后，把移液器量程调至最大值，且将移液器垂直放置在移液器架上； 3、根据使用频率所有的移液器应定期用肥皂水清洗或用 60 ％的异丙醇消毒，再用双 蒸水清洗并晾干； 4、避免放在温度较高处以防变形致漏液或不准； 5、发现问题及时找专业人员处理。  注意的问题 加样： 加酶标液： 加底物： 加终止液： 震荡： 盖膜： 洗板： 洗涤液的要求 握板的要求 注意的问题 比色： 孵育时间： 操作时差的问题： 质控问题：内部质控、外部质控 影响ELISA测定结果的干扰因素 外源性干扰因素：溶血、细菌污染、标本保存不当、标本凝集不全、添加剂 内源性干扰因素：RF、补体、嗜异性抗体等 结果解释 图标演示 三种梅毒血清 学试验的结果解释 试验结果 意义 RPR+FTA-ABS+TPPA+ 梅毒 RPR+FTA-ABS-TPPA- 生物学假阳性 RPR-FTA-ABS+TPPA- 极早期梅毒 RPR-FTA-ABS+TPPA+ 治愈梅毒 RPR-FTA-ABS-TPPA- 排除梅毒、AIDS合倂