课件：酶与酶工程绪论.ppt

* * * * 分子酶学工程的概念 分子酶学工程可以看做是蛋白质工程（包括分子进化）和酶工程相融合所产生的一门科学技术。 分子酶学工程包括在分子水平认识酶的基础上改进酶、模拟酶和全新设计酶。 改进，模拟，设计 结构分析 功能分析 纯 化 工 程 酶 分子酶学工程基本流程图 天然酶 分子酶学工程的概念 分子酶学工程的内涵:是以天然酶的结构与功能为基础，以酶分子工程为核心，研究工程酶的理论、策略和方法，工程酶的催化效率和机制，开发酶的新功能、新性质，发现和创造经济实用的新型生物催化剂。 分子酶学工程的出现表明人们已经按照自己的意图来改进、模拟和设计新酶并且正在有效地把工程酶应用于经济建设和科学技术研究中去。 在了解催化机制的基础上人为地提高酶的催化效率是分子酶学工程的主要目标， 并由此创造出高催化效率、经济实用的酶。 分子酶学工程的基本策略和方法 分子酶学工程研究主要涉及三个相互关系的内容： 一是发展构建工程酶的理论、策略和方法； 二是在考察和研究生物多样性的基础上发现新的酶及其工程化； 三是扩大工程酶的应用领域。 分子酶学工程的基本策略和方法 1）在对酶结构与功能分析的基础上，应用基因工程、蛋白质工程（包括分子进化）技术改变或完善天然酶某些性质并构建出更加实用的新酶，如进化酶、模块酶和杂和酶等； 2）在分子免疫学、有机化学和分子酶学基础上，应用细胞工程、抗体工程及分子印记等技术从理论和实际两方面研究抗体酶、合成酶、印记酶和酶的化学修饰； 分子酶学工程的基本策略和方法 3）非水相分子酶学工程的研究打破了酶只能在水相中催化的传统概念，不仅开辟了分子酶学工程的新领域，而且为酶在化学、材料科学、医药科学及生物检测中的应用展示了广阔的前景，同时也可能成为发展和实现“绿色化学”的一个关键的突破点； 分子酶学工程的基本策略和方法 4）核酶和脱氧核酶也成为分子酶学工程的一个新领域，别构酶和脱氧酶的设计和应用将可能成为纳米技术中的重要内容； 5）生物传感器是分子酶学工程不可分割的组成部分， 它正向生物芯片、生物计算机方向发展； 分子酶学工程的基本策略和方法 6）组合生物催化（combinatorial biocatalysis）可以高效率产生新型化合物库，为酶的抑制剂和酶标药物的设计开辟一条新途径。 基因组学与蛋白质组学的进展将会推动和帮助新酶的发现。 工程酶的分类 蛋白质酶 非蛋白酶 模拟酶 核酶(ribozyme, RNAzyme) 脱氧核酶(detoxribozyme, DNAzyme) 肽酶(pepzyme) 抗体酶(abzyme) 合成酶(synzyme) 印记酶(imprinting enzyme) 杂合酶(hybrid enzyme) 模块酶(modular enzyme) 进化酶(evolved enzyme) 蛋白质工程酶 化学修饰酶 工程酶（水相，非水相） 1.4 酶与酶工程的研究趋势 从发展方向分析，今后十年酶与酶工程领域的研究热门有以下几方面： 酶结构与功能的研究 生物催化过程的研究 改造酶的催化特性及新酶设计 应用酶工程 1、酶的结构与功能的研究： 研究酶的结构与功能、酶的催化作用机理永远是酶学研究的主题。 酶的结构尤其是动态结构、功能尤其是空间结构与功能的关系共同构筑了分子酶学的主要内容，功能酶学和蛋白质组学的渗入和参与为酶学研究增加了新内涵。 2、生物催化过程的研究： 通常生物催化过程不受通用的技术或底物和产物性质的限制。新的催化过程的可行性往往由生物催化剂效率决定。 生物催化过程不同于常规的化学过程，它经常受到在技术条件下的蛋白质稳定性及在细胞中生理生化作用的影响。 过程 底物 产物 经济情况 产物回收 生物催化剂选择 生物催化剂表征 生物催化剂工程 应用 筛选 酶或细胞 动力学 反应条件 结构信息 细胞工程 过程工程 酶工程 蛋白质工程 新反应 稳定性 固定化 辅因子再生 多相系统 下游 原位回收 生物催化过程的开发流程 生物催化过程又是典型的高度不均一过程，理论上 需要特殊设计的硬件部分， 需要有高催化效率的生物催化剂， 需要实施计算机控制的软件， 需要能降低成本的回收和再利用技术， 这是生物催化过程，尤其是工业生物催化的四个“必需”。 3、改造酶的催化特性及新酶设计 改造酶的特性最有效的方法是定位突变（Site-directed Mutagenesis）和定向进化（Directed Evolution in Vitro）。 定位突变技术只对某些氨基酸残基进行替换、删除、天加或修饰，并不能从根本上改变酶的高级结构，故有一定的局限性。 体外定向进化不需要酶的结构、功能关系和催化机制方面的信息。 它采用随机过程，用易错PCR（Error-prone PCR）产生基因突变从