快速构建CRISPRCas9基因组靶向编辑系统.pdf

ISSN 1007-7626 中国生物化学与分子生物学报 http :/ / cjbmb． bjmu． edu． cn 2015 10 年 月 CN 11-3870 / Q Chinese Journal of Biochemistry and Molecular Biology 31 (10):1117 ～ 1124 · · DOI :10. 13865 /j ． cnki． cjbmb． 20 15. 10. 16 技术与方法 快速构建 CＲISPＲ / Cas9 基因组靶向编辑系统 * ， ， ， 王 令 张 涛 路宏朝 尹亚军 ( ， 72300 1) 陕西理工学院生物科学与工程学院 陕西汉中 CＲISPＲ / Cas9 ， 摘要 核酸酶作为一种新的基因组靶向编辑技术 已成功应用于多种动植物基因组 ． CＲISPＲ / Cas9 ． EA V- 修饰研究 作用后的阳性细胞筛选和富集是该技术的关键之一 本研究以鸡 HP (endogenous avian retrovirus-HP) MSTN (myostatin) ， 、 基因和 基因为例 从靶位点的选择 表达载体 、 4 ， CＲISPＲ / Cas9 构建 双基因报告载体构建和核酸酶活性验证 个方面 系统研究了 核酸酶技术平 ． ， ， 100% 台 结果表明 利用寡聚核苷酸直接退火方法 构建表达载体和报告载体的阳性率分别高达 89. 5% ． PuroＲ (puromycin resistant gene) eGFP (enhanced green fluorescent protein) 和 报告载体的 和 ， CＲISPＲ / Cas9 ， 基因的成功表达表明 构建的 系统能有效切割靶序列 并用于后续阳性克隆的筛选 ．