牛奶中酪蛋白和乳糖分离与纯度鉴定论文伏孟瑜.docxVIP

牛奶中酪蛋白和乳糖的分离及鉴定 谢青翠 吴艳贞 马冬妮 （大理学院药学与化学学院 大理 671000） 摘要：本文通过用等电沉淀法从牛奶中分离酪蛋白和乳糖，并且采用颜色反应和旋光性鉴定酪蛋白和乳糖。 关键词：牛奶；酪蛋白；乳糖；分离；鉴定 Isolation and identification of casein and lactose in milk XIE Qing-cui, WU Yan-zhen, MA Dong-ni (College of ?pharmacy and Chemistry ,Dali University．Dali 671000，Yunnans，China) Abstract: This paper isolated by isoelectric precipitation of casein and lactose from milk, and the use of color reactions and optically active identification of casein and lactose. Keywords: Milk; Casein protein; Lactose; Isolation; Identification 牛奶是一种乳状液主要由水、脂肪、蛋白质、乳糖和盐组成。酪蛋白是牛奶中的主要蛋白质,是含磷蛋白质的复杂混合物。蛋白质是两性化合物,当调节牛奶的pH达到酪蛋白的等电点(pH=4.8)时蛋白质所带正、负电荷相等,呈电中性,此时酪蛋白的溶解度最小,会从牛奶中沉淀出来,以此分离酪蛋白。因酪蛋白不溶于乙醇和乙醚,可用此两种溶剂除去酪蛋白中的脂肪。 乳糖是一种二糖,它由D-半乳糖分子C’上的半缩醛羟基和D-葡萄糖分子C4上的醇羟基脱水通过B-1,4苷键连接而成。乳糖是还原性糖,绝大部分以α-乳糖和β-乳糖两种同分异构体型态存在, 20゜C时α-乳糖的比旋光度为+86゜,β-乳糖的比旋光度为+35゜,水溶液中两种乳糖可互相转变,因此其水溶液有变旋光现象。乳糖也不溶于乙醇,当乙醇混入乳糖水溶液中,乳糖会结晶出来,从而达到分离的目的。 1材料、仪器与试剂 1.1材料 来思尔袋装纯牛奶 1.2仪器 DF—101S恒温水浴锅（巩义市予华仪器有限公司）、SHZ—D(Ш)循环水式真空泵（巩义市予华仪器有限公司）、圆盘旋光仪、酸度计 1.3试剂 10%醋酸溶液、95%乙醇、乙醚、碳酸钙固体、1%CuSO4溶液、5%NaOH溶液、茚三酮溶液、浓硝酸溶液、浓氨水 2实验方法 2.1牛奶中酪蛋白的分离 取100mL新鲜牛奶,在恒温水浴中加热至40゜C,边搅拌边慢慢加入10%醋酸溶液,使牛奶pH=4.8,用尼龙布过滤酪蛋白并用蒸馏水洗涤一两次(在滤液中加入一定量的粉状碳酸钙并搅拌几分钟，留作下面的实验2.2使用。)把沉淀转移至烧杯中，依次用乙醇、乙醇和乙醚的等体积混合液、乙醚洗涤酪蛋白,去除脂肪,每次洗涤都用玻璃棒充分搅拌酪蛋白以很好的除去脂肪。抽滤后把固体转移至表面皿上，让乙醚挥发掉，称其重量得9.0g。 2.2牛奶中乳糖的分离 将2.1中加入碳酸钙的滤液进行加热，使其沸腾一段时间后，抽滤以除去蛋白质和多余的碳酸钙,把滤液转移至烧杯中浓缩至约15mL,稍冷后,在热溶液中加入约90mL95%乙醇,再加热,使其混合均匀,趁热过滤,滤液应澄清。滤液移至锥形瓶中,加塞,放置1-2天,让乳糖充分结晶,过滤分离出乳糖晶体。用冷的95%乙醇洗涤结晶,一般应对乳糖重结晶,干燥后称重得1.94g。 2.3牛奶中酪蛋白的鉴定 2.3.1双缩脲反应 在小试管中加入5滴酪蛋白溶液和5滴5%NaOH,摇匀后加入2滴1%硫酸铜溶液。将试管振摇；观察颜色变化。 2.3.2茚三酮反应 在小试管中加入10滴酪蛋白溶液，然后加4滴茚三酮试剂，加热至沸腾，即有蓝紫色出现。 2.3.3蛋白黄色反应 在小试管中，加入10滴酪蛋白溶液及 3滴浓硝酸，水浴中加热，生成黄色硝基化合物。冷却后再加入15滴5%NaOH溶液，溶液呈橘黄色。 2.4牛奶中乳糖的旋光度测定 准确称取1．25g乳糖，用少量蒸馏水溶解，转入25 mL容量瓶中定容，将溶液装于旋光管中，立即测定其旋光度。每隔1min测定1次，至少测定6次，8min内完成，记录数据。10min后，每隔2min测定1次，至少测定8次，20min内完成。记录数据并计算出比旋光度。迅即在样品管中加入2滴浓氨水摇匀，静置20min后测其旋光度并计算出比旋光度。 3结果与讨论 3.1实验结果 从100ml牛奶中分离得到的酪蛋白的质量为9.0g,则牛奶中酪蛋白的含量为9.0g/100mL。 从100ml牛奶中分离得到