GCMS研究栝楼桂枝汤和其入脑挥发性成分.docxVIP

GC—MS研究枯楼桂枝汤和其入脑挥发性成分 ［摘要］探讨挥发性成分在复方中的作用，寻找枯 楼桂枝汤治疗脑卒中后肢体痉挛的物质基础。采用水蒸气蒸 馆提取枯楼桂枝汤及其组方药材天花粉、桂枝、生姜、白芍、 大枣、甘草的挥发油，通过GC-MS对扌舌楼桂枝汤及其组方药 材的挥发性成分进行鉴定及比较，同时分析灌胃给药复方后 进入大鼠脑组织的挥发性成分。桔楼桂枝汤的挥发性成分主 要依次来自桂枝、生姜、大枣、天花粉；入脑成分则主要来 自天花粉的挥发性成分。与组方药材相比，经配伍后的枯楼 桂枝汤的挥发性成分变化很大；灌胃给药复方后，入脑成分 主要来自天花粉的挥发性成分，提示挥发性成分通过脑组织 进而发挥治疗脑病作用，间接改善脑卒中后所引起的肢体痉 挛等症状。 ［关键词］枯楼桂枝汤；组方药材；挥发性成分；GC-MS； 入脑成分 ［收稿日期］2013-12-11 ［基金项目］福建省科技厅重点项目(2012Y0041 )；福 建省教育厅项目(JA12176)；福建省大学生创新创业训练计 划项目(201310393010) ［通信作者］陈立典，教授，博士生导师，Tel: (0592) E-mail： clidianlab@gmai1. com ［作者简介］李煌，博士研究生，主要从事中药化学成 分及质量控制研究，Tel: (0592) E-mail： Lhfjtcm@163. com 复方枯楼桂枝汤来自名医张仲景的《金匮要略》，由天 花粉、桂枝、白芍、甘草、生姜、大枣组成，具有解肌调营, 养营生津之功效，并经临床剂量增减而成验方。经方主要治 疗太阳汗出恶风的柔痉，病机为邪阻筋脉，营卫不利，主要 症状以身体强硬不适为主［1］。现代临床用于治疗脑卒中后 引起的肢体痉挛等症，疗效确切［2-3］ o目前经批准为福建 省第二人民医院院内制剂(闽2013S0001)o 目前对于桔楼桂枝汤的研究大多限于其中单味药的成 分和药理活性研究，而对于枯楼桂枝汤整方的物质基础研 究则少有报道，为探讨挥发性成分在复方中的作用，寻找 枯楼桂枝汤治疗脑卒中后肢体痉挛的物质基础，本研究采 用气相色谱-质谱(GC-MS)联用法对椎楼桂枝汤中挥发性成 分进行分析研究，并在相同条件对各单味药材进行了与复 方的分析比较，为枯楼桂枝汤的物质基础研究奠定基础。 在生物体中，药物必须透过血脑屏障进入脑组织才能发 挥对中枢神经系统的作用［4］。这些成分是否能进入体内， 特别是能否到达脑组织发挥相应的药效作用也未见报道。为 此，本实验将对枯楼桂枝汤挥发油灌胃给药后进入大鼠脑组 织中的挥发性成分进行分析，进一步研究和探讨复方改善脑 卒中后肢体痉挛的药效物质基础。 1材料 1.1 仪器 Agilent GC-6890N/MS-5975N 气相质谱仪 （Agilent公司）；98-1-B型电子调温电热套（天津市泰斯 特仪器有限公司）；FA2004型电子天平（上海精密科学仪器 有限公司）；DLSB-5/20低温冷却液循环泵（郑州长城科工贸 有限公司）；挥发油提取器（郑州中天实验仪器有限公司）。 1.2试药 天花粉（福建省福州回春中药饮片厂有限公 司，批；白芍（福建省福州回春中药饮片厂有 限公司，批；桂枝（福建省福州回春中药饮片 厂有限公司，批号121019）；甘草（福建省福州回春中药饮 片厂有限公司，批；大枣（福建省福州回春中 药饮片厂有限公司，批号120315）；生姜（福建省福州回春 中药饮片厂有限公司，批号201301022）；所有样品由福建中 医药大学中药鉴定教研室杨成梓副教授鉴定，符合《中国药 典》（2010年版）的规定；乙瞇（国药集团化学试剂有限公 司）、无水硫酸钠（阿拉丁试剂有限公司）等均为分析纯。 2方法 2.1供试品溶液制备 取样品处方中的药材量，采用挥 发油提取器提取，加10倍量水，回流提取6 h后，收集挥 发油至5 mL量瓶中，用乙瞇定容至刻度，经无水硫酸钠脱 水后避光备用。分别取样品处方中的单味药材(天花粉、桂 枝、白芍、生姜、大枣、甘草)，采用挥发油提取器提取， 加10倍量水，回流提取6 h后，收集挥发油至5 mL量瓶 中，用乙瞇定容至刻度，经无水硫酸钠脱水后避光备用。 2.2 GC-MS色谱条件 HP-5MS毛细管色谱柱(250 umX30.0 m, 0.25 um)；载气为高纯氨气；流速1.0 mL - min-1,进样口温度280 °C,分流比30 ： 1。程序升温: 初始温度70 °C,保持2 min,以4 °C - min-1升温速率升 至200 °C,保持2 min,再以10 °C ? min-1升温速率升至 280 °C,保持7 mine所得挥发油相对含量采用峰面积归一