以PUPAVA包埋菌体颗粒於气举式反应器中处理含甲苯与乙酸乙酯废气.ppt

以PU/PVA包埋菌體顆粒於氣舉式反應器中處理含甲苯與乙酸乙酯廢氣之研究第一年度：造成抑制現象的原因探討 計畫編號：CHU-94-TR-05 1.0 簡介 國內許多作業製程常用到大量的揮發性有機溶劑（VOCs），逸散所造成之污染相當普遍，對於環境及人類會造成重大的衝擊。 對於含VOCs的廢氣，一般皆採用物理–化學方法來處理，雖然處理效果良好，但相對的處理成本較高且可能會產生二次污染的問題，所以近年來以具低成本、高處理效率且無二次污染問題等優點的生物處理法最具發展潛力。 就噴塗業來說，其製程中所產生之廢氣以甲苯和乙酸乙酯為主，而甲苯和乙酸乙酯皆為高生物分解性之揮發性有機化合物，所以很適合用生物濾床來處理 。本實驗室過去發現在高濃度乙酸乙酯存在下，甲苯與二甲苯之去除會受到抑制而導致處理效果大幅下降。 本研究首先想了解噴塗業所排放含甲苯和乙酸乙酯廢氣，在生物濾床處理時所產生的抑制現象，並且進一步探討使用固定化後來，該抑制現象是否能夠有效改善。 2.0 材料與方法 菌株來源 Rhodococcus fascians AC6（只分解乙酸乙酯；中興李季眉教授）Rhodococcus sp.B5（可分解甲苯和乙酸乙酯；中興李季眉教授）Pseudomonas putida F1 ATCC 700007（只分解甲苯；新竹市食品所BCRC）。 菌種保存方法為採用繼代培養方法與低溫保存方法。 繼代培養方法為將純菌以平板法培養，保存約1個月。藉由替換固態培養皿，以重複進行培養達到菌種保存之目的。 低溫保存方法為將菌液與甘油（glycerol溶液濃度為20％）以1：1（v/v）混合注入2 ml之冷凍離心管中，並置入-20℃之低溫保存箱中進行保存。 2. 材料與方法 培養基 菌種的活化培養基為甲苯或乙酸乙酯等基質，以及酵母萃取液及豐味通。工作培養基則如表1所示。 氣相甲苯及乙酸乙酯分析 以氣密針筒抽取0.5 ml待測氣體樣品，注入氣相色層分析儀（GC/FID）中。 氣相層析儀（GC/FID）的操作條件，使用管柱：JW, DB-5 融合矽膠毛細管柱，長30m, 內徑0.53mm ID，吸附膜為5.0 μm。操作溫度依序為：管柱加熱器：120 oC, 注射器：210 oC, 偵測器：230 oC。 2. 材料與方法 菌量測定方法 (1) 光學密度測量法 菌體量測定方法為濁度測定法（optical density，O.D.），利用波長為600 nm之分光光度計，測量待測樣品菌液之吸光度（O.D.600），並以培養液的上澄液校正之。樣品經過稀釋後之光學密度讀值需達0.5以下，方可進行測量。 (2) 蛋白質分析方法 蛋白質的測定採BCA測定法（BCA Protein Assay）（Pierce chemical company, 1997），可測定的蛋白質濃度範圍為20~2,000μg/mL。 BCA分析試劑包括A、B兩試劑及2.0 mg / ml Albumin standard。將A與B試劑以50：1（v/v）的方式均勻混合作為Working Solution，有效保存期限為24小時。 取0.1 ml的蛋白質標準試劑或樣品，加入2 ml的Working Solution，置於37℃水浴槽中反應30分鐘後靜置至室溫，再以分光光度計於波長562 nm下量測其吸光度（O.D.562）。 3.1 單一菌株分解甲苯及乙酸乙酯的能力及最佳的成長條件 最佳培養條件 20%的植種率、pH 7、28 oC 菌株分解能力 就乙酸乙酯而言，菌株AC6的分解能力明顯優於菌株B5 就甲苯而言，菌種B5的分解能力些微優於菌株F1。 而當甲苯及乙酸乙酯的負荷增加時，每一種菌株分解有機物所需的時間都明顯增加，但是仍然在可以分解的範圍之下。 3.2 等比例增加T/E負荷對混合菌株分解有機物的影響 懸浮菌株降解95%甲苯所需時間 各獨立菌株皆因為甲苯和乙酸乙酯的添加量增加，需要更多的時間來分解甲苯；即使是也是如此。 混合菌株所需的時間卻因為混合而造成嚴重的延遲；而且是愈高負荷，影響愈大。按推論，這是群族之間競爭的結果；而菌株AC6和B5對此效應比較輕微。 依據（Hwang et al., 2003），得知菌株AC6在某些條件下，的確可以幫助菌株B5快速分解乙酸乙酯，而讓菌株B5可以更專一地去分解甲苯，在生態學上形成了互助的效應。 3.2 等比例增加T/E負荷對混合菌株分解有機物的影響 懸浮菌株降解95%乙酸乙酯所需時間 各獨立菌株也會因為甲苯和乙酸乙酯的添加量增加，而些微增加所需要的時間來有效分解乙酸乙酯；即使是混合菌株也是如此。 混合菌株所需的時間卻只有在菌株B5和F1的組合下，才會造成嚴重的延遲，其他並不會太嚴重。 按推論，這也是群族之間競爭的結果；而菌株