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HBV 一 DNA定量检测与HBV血清标志物的相关性分析 宋林林 (山西省汾阳医院检验科 山西汾阳032200) 【摘要】目的 探讨HBV- DNA荧光定量检测与HBV血清标志物定量检测结果并 进行分析。方法同时检测638份血清标木用时间分辨荧光免疫分析技术(TRFIA) 对乙肝五项定量分析；用实时荧光定量PCR技术(FQ)-PCR技术对HBV-DNA定量 分析。结果(1)组 224 例,HBV-DNA 阳性率 98.2%(220/224);(2)组 40 例 HBV?DNA 阳性率 100%(40/40); (3)组 220 例 HBV-DNA 阳性率 47.3%(104/220); (4)组 82 例,HBV-DNA 阳性率 53.6%(44/82);(5)组 22 例,HBV-DNA 阳性率 36.3%(8/22);(6) 组34例,HBV-DNA阳性率17.6(6/34);(7)组12例和(8)组4例未检出HBV-DNA。 结论 在各种HBV模式中，以HBeAg阳性者的病毒复制水平最高。应用FQ-PCR 定量检测HBV-DNA能准确地反映体内的HBV真实感染和复制情况，与TRFIA联合 应用对乙肝的临床诊治和预后判定具有重要意义。 【关键词】HBV 血清标志物 乙型肝炎病毒HBV- DNA 荧光定量PCR 【中图分类号】446【文献标识码】A【文章编号】2095-1752 (2012) 29-0104-02 乙型肝炎是世界上最常见的传染病之一，每年死于该病的有100多万人。 乙型肝炎病毒感染可导致肝脏的炎症，称为乙型病毒性肝炎(简称乙型肝炎)。 是威胁我国人群健康最重要的传染病之一。HBV的传播途径主要有密切接触传播, 母婴传播，血液传播和性传播。HBV携带者和乙型肝炎患者的血液、唾液、精液 和阴道分泌物等都可以成为传播源。80%-90%的人在感染HBV后不出现临床症状, 少数感染后出现急性肝炎的症状，部分HBV感染者可发展为慢性迁延性肝炎或 原发肝癌。乙型肝炎TRFIA检测项目主要包括两对抗原抗体(即HBsAg、HBsAb、 HBeAg. HBeAg),和一个抗体(HBcAb)。故友称为乙肝两对半或乙肝五项。它 反映病毒感染人体后机体免疫的状态，在判断HBV感染的程度，用药的效果及 预后判断中有一定局限。HBV-DNA的检测是HBV感染最具敏感性和特异性的指 标，能反映病毒在体内复制的真实情况，木研究采用FQ-PCR和TRFIA对乙肝五 项和HBV—DNA之间的相关性进行探讨分析，二者结合对乙肝的诊断治疗和预后 评估提供实验的科学依据。 1材料与方法 1.1研究对象638例实验标本来自2011年7月至2011年12月我院 门诊病人，其中男性432例，女性206例，年龄5-69岁，平均年龄35.8岁。 1.2实验仪器 上海新波生物技术有限公司提供的EFFICUTA全自动样 本前处理系统，及ANYTEST2000 U寸间分辨率荧光分析仪，荧光定量PCR仪为杭 州博日FQD-66A定量PCR分析仪。 13 实验试剂FQ?PCR试剂为中山大学达安基因股份有限公司生产的 HBV-DNA荧光定量PCR诊断试剂盒，HBV?DNA的测定单位为拷贝/毫升，或 Copies/mloTRFIA试剂为苏州新波生物技术有限公司生产的乙肝五项诊断试剂盒。 1.4实验方法采用常规的高温裂解法对HBV-DNA进行定量测定，同 时做阴性、临界阳性、强阳性质控品及室内质控。标准参照品浓度为生产厂家的 试剂盒统一提供。HBV阳性定量参考品浓度为：1.0times;104IU/ml/管、 1.0times;105IU/ml/管、1.0times;106IU/ml/管、1.0times;107IU/ml/管。A:标本 的提取:取100ul血清加入等量DNA浓缩液充分混匀,12,000rpm离心10分钟； 去上清，沉淀加20UIDNA提取液充分混匀，瞬吋离心数秒；100°C恒温孵育 10plusmn;l分钟；12, OOOrpm离心5分钟，分别加处理后的样品上清液及阳 性定量参考品各2ul于反应管内，8000rpm离心1分钟进行PCR扩增反应。B:PCR 扩增：93°C2 分钟；93°C45 秒rarr;55°C60 秒rarr;10 个循环；93°C30 秒rarr;55°C 45秒rarr;30个循环。FQ-PCR自动分析仪分析反应结果得出标本的乙肝病毒拷 贝数。正常参考值为lt;1.00times;103 拷贝/ml。ge; 1 times;10 3 IU/ml 者为 阳性，lt; 1 times;10 3 IU/mL 者为阴性。 乙肝五项用时间分辨荧光免疫分析技术(TRFIA)操作：所有操作严格 按说明书进行，每次操作均带标准品，每个标准品均做双孔测