课件：慢性乙肝分子指标.ppt

致力于数据挖掘，合同简历、论文写作、PPT设计、计划书、策划案、学习课件、各类模板等方方面面，打造全网一站式需求 * * * * YMDD的定量检测 YMDD的定量检测 YMDD的定量检测 YMDD的定量检测 YMDD的定量检测 与其它方法的比较 Comparison of results obtained by sequencing, pyrosequencing and real-time PCR Types Sequencing pyrosequencing real-time PCR rtM204 25 (36%) 24 (35%) 23 (33%) rtM204I 26 (38%) 24 (35%) 21 (30%) rtM204V 18 (26%) 19 (27%) 20 (29%) rtM204I + rtM204V 0 2 (3%) 5 (8%) ? YMDD变异定性判断的临界值 定性判断：ΔCt 3.5，此时病毒群体中突变株比例大于10% 与测序法比较，15例标本结果完全符合 YMDD变异定性判断的临界值 什么时候开始检测YMDD变异 拉米夫定治疗过程中YMDD变异情况 治疗时间 HBV DNA大于104copies/ml例数 YMDD变异例数* 6个月 6 1（17%） 6~12个月 26 14（54%） 12~24个月 38 26（68%） 24~36个月 38 38（100%） * 各组之间两两比较均有显著差异（P0.05）。 YMDD变异株的动态变化 YMDD变异株的动态变化 YMDD检测试剂—应用方法 对接受拉米夫定治疗的慢性乙肝患者进行耐药监测 治疗前检测一次（约有10-20%的人在治疗前就有YMDD变异） 治疗开始后第七个月开始，每三个月检测一次 拉米夫定耐药、替比夫定耐药（YIDD） 恩替卡韦治疗YMDD变异患者存在耐药高风险 慢性乙肝的基因分型 乙肝病毒分八个基因型：根据基因组序列的差异可以分为A～H八种亚型，我国以B型（41%）和C型（53%）为主 不同基因型病毒感染的病程和后果不同：C型对肝的损伤比B型严重，基因型C比基因型B更容易发展成为肝硬化 不同的基因型对药物的应答也不一样：基因型B比基因型C对干扰素治疗的应答率高 HBV基因分型PCR检测试剂 运用多重、多色实时PCR技术，分别对乙肝病毒（HBV）各种基因型序列进行分析 根据国内HBV基因型的特点，设计能检测HBV A~D四种基因型特异性引物及探针 研制开发具有自主知识产权的乙肝病毒（HBV）基因分型多重、多色实时PCR检测试剂盒 HBV基因分型—结果判断方法 B管（Ct36） B管（Ct≥36） C管（Ct36） B型、C型HBV复合感染2 C型HBV C管（Ct≥36） B型HBV 非B非C型，或HBV（-） HBV基因分型—分型识别率 分型识别率＝（12+22）/35＝97％ 样本数 百分比 B型 12 34% C型 22 63% 未检出 1 3% 总计 35 100% HBV基因分型—分型灵敏度（1） HBV B型血清样本灵敏度约在2×103IU/ml HBV基因分型—分型灵敏度（2） HBV C型血清样本灵敏度约在1×103IU/ml 共价闭合环状DNA (cccDNA)检测 HBV cccDNA是乙肝病毒前基因组RNA复制的原始模板 只有彻底清除了cccDNA，乙肝的治疗才能算真正有效 HBV cccDNA可作为评价抗病毒治疗效果新的有效指标 HBV cccDNA PCR检测试剂 运用实时PCR技术，根据乙肝病毒共价闭合环状DNA（cccDNA）和双链松弛环状DNA（rcDNA）分子结构上的差异，即rcDNA负链上的缺口和正链的不完整性，设计一对特异性cccDNA的引物，分别杂交于1500和2100邻近区域(以EcoR I切点为物理起始原点)，同时设计一条杂交于负链3’端近缺口处检测探针，研制开发具有自主知识产权的HBV cccDNA实时PCR检测试剂盒。 HBV cccDNA检测试剂原理 rcDNA不能被扩增 无荧光信号 cccDNA能被扩增 检测到荧光信号 P1 1820 1590 + 3200（1） EcoR I P2 － EcoR I 5‘ + P2 3200(1) 5‘ 3‘ 1590 3‘ 1820 － P1 阿德福韦治疗乙型肝炎 阿德福韦为5’-单磷酸脱氧阿糖腺苷类似物，可明显抑制HBV DNA复制 HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者，1、2、3年时的耐药发生率分别为0%、1.6%、3.1% HBeAg阴性者1、2、3年的耐药发生率分别为0%、3.0%、5.9%~11% 阿德福韦耐药突变位点 rtN236T、r