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EB病毒相关胃癌组织中VEGF表达的研究 孙萍1(通讯作者)罗兵2周冬梅3 (1烟台毓璜顶医院山东烟台264000) (2青岛大学医学院微牛物教研室山东青附266003) (3烟台市烟台山医院山东烟台264001) 【摘要】目的:检测 EBV相关胃癌(EBV associated gastric carcinomas, EBVaGC) 和与之匹配的 EBV 阴性胃癌(EBVnetative gastric carcinomas, EBVnGC) VEGF 的 表达，同时检测EBV相关基因的表达，探讨它们在EBVaGCs发生发展中的作用。 方法：选取13例EBVaGCs、45例与之相兀配的EBVnGCs和58例相应癌旁组织作 为研究对象，采用免疫组化技术检测VEGF蛋白的表达；RT-PCR和Southern杂交 技术检测EBV相关基因(核抗原EBNA1和EBNA2编码基因，潜伏膜蛋白LMP1 编码基因，早期基因BARF1和BHRF1)的表达。结果：①癌组织VEGF阳性率为 72.41%(42/58),明显低于相应癌旁组织 87.93%(51/58) (P二0.022)； EBVaGC 组织 中VEGF阳性表达率为84.61% (11/13),明显高于EBVnGC组织68.9% (31/45), 两组间差别有统计学意义(chi;2二3.928, P= 0.047)② 13 例 EBVaGCs EBNA1 mRNA 均为阳性,而EBNA2和LMP1 mRNA均为阴性;早期基因中有6例BARF1表达阳 性,2例BHRF1表达阳性。结论:?EBVaGC及EBVnGC中高表达VEGF,但是EBVaGC 中VEGF的表达与血管牛成和淋巴结转移关系密切程度不如EBVnGC②EBVaGC 组织中LMP1和EBNA2表达阴性，与c-myc的表达和细胞增殖无明显相关性，早 期基因BARF1和BHRF1可通过转化细胞等作用促进肿瘤的发牛发展。 【关键词】胃癌EB病毒VEGF RT-PCR 【中图分类号JR730.2【文献标识码】A【文章编号12095-1752(2012)20-0128-03 EB病毒(Epstein-Barr Virus, EBV)是重要的致瘤病毒,以往的研究多 集中在EBV与Burkitt淋巴瘤、鼻咽癌、何杰金病和免疫缺陷病人的B淋巴细胞 瘤等的关系，近年来研究发现约7?16%的胃癌组织EBV阳性，EBV感染在胃癌 发生发展中的作用也愈来愈受到重视。本研究采用免疫组化方法检测13例 EBVaGCs、45例与之相匹配的EBVaGCs以及相应癌旁组织中VEGF的表达，RT-PCR 检测EBV相关胃癌组织中病毒潜伏期基因EBNA1、EBNA2、LMP1以及早期基因 BARF1和BHRF1的表达，以探讨EBVaGC中EBV相关基因与PCNA和c-myc基因 表达的关系及在胃癌发生发展的作用。 1材料和方法 研究对象： 随机选取青岛大学医学院附属医院、青岛市立医院及烟台毓璜顶医院 2008年1月?2009年12月间185例胃癌患者手术切除的新鲜胃癌组织和相应癌 旁组织（距离癌组织5cm以上）制备组织切片，经PCR-Southern和原位杂交检测证 实185例胃癌中有13例EBVaGCs,同时选择年龄、性别、病理类型和临床分期 与之相匹配的45例EBVnGCs作为研究对象。58例胃癌病人平均年龄58岁（31? 81岁），其中男性48例，女性10例，全部病例均经病理诊断证实。 1.2主要试剂和耗材： Reverse Transcription kit （美国 Promega 公司），TRIzol 试剂（美国 GIBCO 公 司），PCR反应体系（上海生工生物技术服务有限公司），Hybond-N+尼龙膜（美国 Amersham pharmacia 公司），Dig Oligonucleotide 3rsquo;-End Labiling kit CSPD、 DNA Molecular Weight MarkerVlII, Digoxigenin-Labeled （徳国 Roche 公司），VEGF 兔抗人单克隆抗体、SP通用型染色试剂盒（北京中杉金桥生物技术有限公司）。 1.3 EBV 相关基因的 RT-PCR 及 Southern blotting 检测 TRIzol法提取组织总RNA,参照逆转录试剂盒要求的标准条件进行cDNA 合成，反转录所得cDNA用作PCR反应的模板。EBV潜伏期基因和早期基因特异 性引物和探针均参照文献设il[l-3],由北京赛百胜公司合成，引物和探针序列以 及PCR产物长度见表lo应用Roche公司提供的Dig Oligonucleotide 3rsquo;-end Labeling Kit对寡核昔酸探针进行标记,具