第三章_蛋白质化学..ppt

第三章 蛋白质化学 Protein Chemistry 蛋白质在生命中的重要性 恩格斯曾指出：“生命是蛋白体的存在方式，这种存在方式本质上就在于这些蛋白体的化学组成部分的不断的自我更新。” 第一，蛋白体是生命的物质基础； 第二，生命是物质运动的特殊形式，是蛋白体的存在方式； 第三，这种存在方式的本质就是蛋白体与其外部自然界不断的新陈代谢。 Nat.Cell Biol.：英国发现“饿死”癌细胞方法 研究人员发现一种名为NF－kB的蛋白质控制着其能量供应方式的转换，如果抑制这种蛋白质的功能，癌细胞就不能按需转换能量供应方式，会进入能量供应不足的状态甚至“饿死”。 JACS：剑桥大学将第21种氨基酸引入线虫细胞 什么是蛋白质？ 蛋白质是一切生物体中普遍存在的，由20种左右天然α-氨基酸通过肽键相连形成的高分子含氮化合物；其种类繁多，具有一定的相对分子量、复杂分子结构和特定生物学功能；是表达生物遗传形状的一类主要物质。 导 学 了解蛋白质的分类； 区别蛋白质的各级分子结构及其功能； 重点掌握氨基酸的结构特点、氨基酸的两性解离与等电点以及蛋白质序列测定； 掌握蛋白质的性质； 掌握蛋白质的各级结构及其作用力； 掌握蛋白质结构与功能的关系。 什么是α-氨基酸？ ----C-C-C-C-COOH γβα ----C-C-C-C(NH2)-COOH α-氨基酸 氨基和羧基均与α碳原子相连 知识点回顾 1、常见AA的结构通式 3、氨基酸的分类 （1）中性氨基酸（1 —NH2，1 —COOH） a. 脂肪族氨基酸 b. 含羟基或硫氨基酸 c. 芳香族氨基酸 d. 亚氨基酸 （2）酸性氨基酸及其酰胺（1 —NH2，2 —COOH） （3）碱性氨基酸（2 —NH2，1 —COOH） 思考题 根据R侧链的极性该如何给氨基酸分类？ 4、氨基酸的性质 （1）物理性质： 除Gly外，氨基酸均含有一个手性?-碳原子，因此都具有旋光性。 思考题：氨基酸溶液pH与pI的关系以及氨基酸的电泳行为？ pH pI时，氨基酸带负电荷，-COOH解离成-COO-，向正极移动。 　 pH = pI时，氨基酸净电荷为零 　pH pI时，氨基酸带正电荷，-NH2解离成-NH3+，向负极移动。 1、紫外吸收法（280nm）定量测定蛋白质时其主要依据是因为大多数可溶性蛋白质分子中含有（）、（）、（）。 2、侧链含有咪唑基的氨基酸是（ ） A、甲硫氨酸 B、半胱氨酸 C、精氨酸 D、组氨酸 3、pH为8时，带正电的氨基酸为（ ） A、Glu B、Lys C、Ser D、Asn 4、精氨酸的pK1=2.17、pK2=9.04（?-NH3）pK3=12.48（胍基）pI=（ ） A、1/2(2.17+9.04) B、1/2(2.17+12.48) C、1/2(9.04+12.48) D、1/3（2.17+9.04+12.48） 5、谷氨酸的pK1=2.19(?-COOH)、pK2=9.67(?-NH3)、pK3=4.25(?-COOH) pI=（ ） A、1/2（2.19+9.67） B、1/2（9.67+4.25） C、1/2(2.19+4.25) D、1/3(2.17+9.04+9.67) （3）氨基酸的化学反应 α-氨基参加的反应 与亚硝酸反应 与酰化试剂反应 与二硝基氟（DNFB）苯反应 形成Schiff’s碱反应 脱氨基反应 与甲醛反应 第三节 蛋白质的结构 一、蛋白质的一级结构 指蛋白质多肽链中的AA排列顺序。 从左到右：N端→C端。 前提 1.样品必需纯（97%以上） 2.知道蛋白质的相对分子量 3.知道蛋白质由几个亚基组成 4.测定蛋白质的AA组成 与AA相关的重要化学反应 1、与HNO2反应 2、与DNFB反应 3、与茚三酮反应 4、成肽反应 1、测定蛋白质分子中多肽链的数目 通过测定末端氨基酸残基的摩尔数与蛋白质分子量之间的关系，即可确定多肽链的数目。 2、多肽链的拆分 可用8mol/L尿素或6mol/L盐酸胍处理，即可分开多肽链(亚基)。 断开二硫键 在8mol/L尿素或6mol/L盐酸胍存在下，用过量的?-巯基乙醇处理，使二硫键还原为巯基，然后用烷基化试剂保护生成的巯基，防止重新被氧化。 用发烟甲酸（过甲酸）氧化 3、末端氨基酸残基测定 N-端氨基酸 DNFB（Sanger）法、Edman化学降解 C-端氨基酸 肼解法、羧肽酶法 3、末端