α半乳糖苷酶法合成α半乳糖基β环糊精的研究.docxVIP

a■半乳糖昔酶法合成a■半乳糖基叩■环糊精的研究 摘要：应用发芽咖啡豆a—半乳糖昔酶法合成a—半乳 糖基一卩一环糊精，研究其合成工艺。通过B o x-B e h n k e n设计等方法，得出工艺条件为ot—半乳糖昔酶用量 7 3 nkat，时间 28 h , p H 6 . 3 ,温度 4 0 °C, 振荡速度7 5 r / m i n ,反应体系包括2 m L醋酸缓冲 液，0 —环糊精0?4 m o 1 / L ,蜜二糖0?8 m o 1 / Lo在此条件下，a—半乳糖基一卩一环糊精绝对产率为2 8.4%,比优化前提高了41. 3%。 关键词：a—半乳糖昔酶；酶法合成；a—半乳糖基一卩 —环糊精； 中图分类号：T S 2 7 3文献标识码：A文章编号: 0439- 8 11419-4041-03 Enzymatic Synthes i s o f a— Galactosyl 一卩一 cyclodextrin b y a— galactosidase SHEN Wang — yangl, JIN Zhen g — y u 2 , GAO H o n g 3 TOC \o 1-5 \h \z Abstract： Parameters a f f e c t i n g the synthes i s o f a— g a 1 a c tosyl —卩一 c y c 1 o d e x trin b y a— galactosidase o f g e r m i n a t i n g coffee beans were s y s t e m a t i c a 1 1 y studied b y B o x — B e h n k e n des i g n . The optimized c o n d itions were a s follows, enzyme concentration, 7 3 n k a t ； R e a c tion time, 2 8 h ； p H, 6. 3 ； Reaction temperature, 4 0 °C ； Osci 1 latory speed, 7 5 r / min； 0— c y c 1 o d e x trin, 0. 4 m o 1 / L ； m e 1 i b i o s e , 0. 8 m o 1 / L ； a n d ace tate buffer , 2 m L, The y i e 1 d o f a— galactosyl 一卩一c y c 1 odextrin was 28.4 % under the s e c o n d itio ns, which was 4 1. 3 % higher than conditions before optimization. Key words： a— g a 1 a c t o s i d a s e ； enzymatic synthes i s； a— g a 1 a c t o s y 1 —p— cyclodextrin 环糊精具有内疏水、外亲水的特殊性质，在制药、化 工、食品等领域被广泛地研究及应用。但其溶解性能不佳， 制约了进一步的应用研究。改性制备分支环糊精，可以扩大 分子亲水区域，提高溶解性［1 一 4 ］。a—半乳糖基一卩一 环糊精是一种分支环糊精，是卩一环糊精的衍生物，其具有 较高的水溶性，分支上的半乳糖基在动物组织中具有特殊的 识别受体，具有广阔的应用前景［5 — 7］。前期研究工作 采用江南大学食品科学与技术国家重点实验室自制的发芽 咖啡豆a—半乳糖昔酶酶法合成得到a—半乳糖基一p—环糊 精，并成功地鉴定了其结构。本实验以0—环糊精和蜜二糖 为原料，优化发芽咖啡豆a—半乳糖昔酶法合成a—半乳糖 基一卩一环糊精的工艺，有利于提高酶法合成的产量和效率, 进而指导生产。 1材料与方法 1 . 1材料 1.1.1试剂发芽咖啡豆a—半乳糖昔酶为江南大 学食品科学与技术国家重点实验室自制［8］；对硝基苯酚 — a—半乳糖昔和蜜二糖购于Sigma-Aldrich 贸易有限公司；其余试剂均为国产分析纯。 1.1.2仪器与设备W a t e r s 6 0 0高效液相 色谱仪，美国Waters公司；D i rect—Q3超纯 水系统，美国M i 1 1 i p o r e公司；D e 1 t a 3 2 0 pH计，梅特勒一托利多仪器有限公司；XW-8 0 A漩涡 混合器，上海医科大学仪器厂；8 0-2离心机，江苏省金 坛市荣华仪器制造有限公司；HW. YS电子恒温水浴锅， 浙江舟山海源仪器厂。 1 . 2方法 1.2.1酶法合成反应将p—环糊精、蜜二糖和发 芽咖啡豆01—半乳糖昔