水中细菌总数的测定.docVIP

PAGE PAGE 3 水中细菌总数的检测 实验目的 1、学习并掌握水的细菌学检测方法 2、了解水质状况与细菌数量在饮用水检测中的重要性。 菌落总数standard plate-count bacteria 水样在营养琼脂上、有氧条件下37°C 细菌总数是评价水质污染程度的主要卫生指标，所测定的细菌总数增多说明水被生活废弃物污染。由于结果不能说明污染的来源，因此必须结合总大肠菌群数来判断污染源和安全程度。 培养基与试剂 2.1 营养琼脂成分 蛋白胨 10 g 牛肉膏 3 g 氯化钠 5 g 琼脂 10~20 g 蒸馏水 1000 mL 2.2 制法：根据实际需要量，按照上述配方称取各成分混合后，加热溶解，调整pH为7.4~7.6，分装于玻璃容器中（如用含有较多杂质的琼脂，应先过滤。），经103.43 kPa（121°C,15 lb 仪器和材料 仪器：高压蒸汽灭菌器、干热灭菌箱、水热恒温培养箱、电炉、天平、冰箱。 材料：灭菌平皿（直径9 cm）、灭菌试管、刻度吸管、三角烧瓶、采样瓶、酒精灯、消毒水、镊子、试管架等。 放大镜或菌落计数器、pH计或精密pH试纸、火柴或打火机。 样品采集 自来水的取样：先将自来水龙头用酒精棉擦拭，再用酒精灯火焰灭菌，打开龙头放水3-5 min，用无菌空三角瓶接取水样200 ml。 纯净水取样：用消毒酒精棉擦拭纯水机出口后，先放走部分水，再用无菌空三角瓶接取水样200毫升。 地表水的取样：应取距水面10—15 检验步骤 生活饮用水（自来水、纯净水）：以无菌操作方法用灭菌吸管吸取1 mL充分混匀的水样，注入灭菌培养皿中，倾注约15 ml已融化并冷却到45°C左右的营养琼脂培养基，并立即旋摇平皿，使 待冷却凝固后，翻转平皿，使底面向上，置于36°C±1 水源水：以无菌操作方法吸取1 ml充分混匀的水样，注入盛有9 ml灭菌生理盐水的试管中，混匀呈1:10稀释液。 吸取1:10稀释液1 ml，注入盛有9 ml灭菌生理盐水的试管中，混匀呈1:100稀释液。按同法依次稀释成1:1000、1:10000稀释液备用。如此递增稀释一次，必须更换一支刻度吸管。 用灭菌吸管吸取1 ml未稀释的水样和2~3个适宜稀释度的水样，分别注入灭菌培养皿内，其余操作同6.1 生活饮用水的检验步骤。 菌落计数及报告方法 作平皿菌落计数时，可用眼睛直接观察，必要时用放大镜检查以防遗漏。在记下各平皿的菌落数后，应求出同稀释度的平均菌落数，供下一步计算时应用。在求同稀释度的平均数时，若其中一个平皿有较大片状菌落产生时，则不宜采用，而应以无片状菌落产生的平皿作为该稀释度的平均菌落数。若片状菌落不到平皿的一半，而其余一半中菌落数分布又很均匀，则可将此半皿计数后乘2以代表全皿菌落数。然后再求该稀释度的平均菌落数。 不同稀释度的选择及报告方法 首先选择平均菌落数在30~300之间者进行计算，若只有一个稀释度的平均菌落数符合此范围时，则将该菌落数乘以稀释倍数报告之（见表1中实例1）。 若有两个稀释度，其生长的菌落数均在30~300之间，则视二者之比值来决定：若其比值小于2，应报告两者的平均数（如表1实例2）；若比值大于2，则报告其中稀释度较小的菌落数（如表1实例3）。若等于2亦报告其中稀释度较小的菌落数（见表1实例4）。 表1 稀释度选择及菌落总数报告方式 实例 不同稀释度的平均菌落数 两个稀释度菌落数之比 菌落总数（CFU/ml） 报告方式（CFU/ml） 10-1 10-2 10-3 1 1365 164 20 － 16 400 16 000或1.6×104 2 2760 295 46 1.6 37 750 38 000或3.8×104 3 2890 271 60 2.2 27 100 27 000或2.7×104 4 150 30 8 2 1 500 1 500或1.5×103 5 多不可计 1650 513 － 513 000 513 000或5.3×105 6 27 11 5 － 270 270或2.7×102 7 多不可计 305 12 － 30 500 31 000或3.1×104 若所有稀释度的平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（见表1中实例5）。 若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（见表1中实例6）。 若所有稀释度的平均菌落数不在30~300之间，则应以最接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（见表1中实例7）。 若所有稀释度的平板上均无菌落生长，则以“未检出”报告之。 如果所有平板上都菌落密布，不要用“多不可计”报告，而应在稀释度最大的平板上，任意数其中2个平板1 cm2中的菌落数，除2求出每平方厘米内平均菌落总数，乘以皿底面积63.