中国药典2015版无菌检查方法适用性试验(直接接种法).pdfVIP

*********公司 *********产品 无菌检查方法适用性试验 1、样品信息 样品名称 生产厂家 规格型号 批号 2 、培养基及试剂 名称 生产厂家 批号 硫乙醇酸盐流体培养基 胰酪大豆胨液体培养基 胰酪大豆胨琼脂培养基 0.9%无菌氯化钠溶液 沙氏葡萄糖液体培养基 沙氏葡萄糖琼脂培养基 冲洗液及稀释液 3、菌种基本信息： 菌种名称 菌种来源 菌种编号 菌种代数 金黄色葡萄球菌 CMCC （B ）26003 大肠埃希菌 CMCC （B ）44102 生孢梭菌 CMCC （B ）64941 枯草芽孢杆菌 CMCC （B ）63501 白色念珠菌 CMCC （F ）98001 黑曲霉 CMCC （F ）98003 4 、菌液制备： 2.1 接种金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至胰酪大豆胨培 养基中或胰酪大豆胨脂培养基上，30～35℃培养 18～24 小时，培养物用0.9%无菌 氯化钠溶液制成每1ml 含菌数小于100cfu 的菌悬液。 2.2 接种生孢梭菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基中，30～35℃培养 18～24 小时，培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml 含菌数小于100cfu 的菌悬液。 2.3 接种白色念珠菌的新鲜培养物至沙氏葡萄糖液体培养基或沙氏葡萄糖琼脂斜面 培养基上，20～25℃培养24～48 小时，培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成每 1ml 含菌数小于100cfu 的菌悬液。 2.4 接种黑曲霉菌的新鲜培养物接种至沙氏葡萄糖琼脂斜面培养基上，20～25℃培养 5～7 天，加入3～5ml 含0.05% （ml/ml ）聚山梨酯80 的0.9%无菌氯化钠溶液，将 孢子洗脱。然后，采用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用含0.05% （ml/ml ） 聚山梨酯80 的0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml 含菌数小于100cfu 的菌孢子悬液。 5、菌落计数： 菌种名称 稀释级别 菌落计数cfu/ml 金黄色葡萄球菌 大肠埃希菌 枯草芽孢杆菌 生孢梭菌 白色念珠菌 黑曲霉 6、无菌检查直接接种法方法适用性试验 6.1 供试品制备：描述供试品制备过程（主要为每个样品的取样部位及用量）。 6.2 试验组：取装量为 ml 硫乙醇酸盐流体培养基，接种 规定的供试品量 （同 6.1），并接种小于100cfu 的金黄色葡萄球菌； 大肠埃希菌、生孢梭菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉按照上述步骤操作， 其中大肠埃希菌、生孢梭菌加入硫乙醇酸盐流体培养基，枯草芽孢杆菌、白色念珠 菌、黑曲霉加入胰酪大豆胨液体培养基。 6.3 对照组：取装量为 ml 硫乙醇酸盐流体培养基3 管，分别接种小于 100cfu 的金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、生孢梭菌；取相同装量的胰酪大豆胨培养基3 管， 分别接种小于100cfu 枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉。 注： 6.1 和6.2 中供试品制备、每种培养基接种供试品的量、培养基装量由企业根 据产品特性和药典的要求确定。 6.4 上述培养基置规定的温度培养，培养时间不超过5 天，逐日观察记录各管试验菌 生长情况。 6.5 验证结果 培养基 硫乙醇酸盐流体培养