不同培养方法对山羊瘤胃上皮细胞生长及角蛋白18-动物营养学报.PDF

动物营养学报２０１６，２８（４）：１２２５⁃１２３２ ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌ ｏｆ ＡｎｉｍａｌＮｕｔｒｉｔｉｏｎ 　 ｄｏｉ：１０．３９６９／ ｊ．ｉｓｓｎ．１００６⁃２６７ｘ．２０１６．０４．０３４ 不同培养方法对山羊瘤胃上皮细胞生长及 角蛋白１８ 表达量的影响 １，２ １∗ １ ２ ∗ 刘思乐 　 康劲翮 　 谭支良　 王　 征 （１．中国科学院亚热带农业生态过程重点实验室，亚热带农业生态研究所，湖南省农业生态过程重点实验室， 长沙 ４１０１２５；２．湖南农业大学生物科学技术学院，长沙 ４１０１２８） 摘　 要： 本试验旨在研究不同培养方法对山羊瘤胃上皮细胞生长及角蛋白１８（ＣＫ１８）表达量的 影响。 采集４２ 日龄山羊的瘤胃上皮组织，分别采用酶消化法和组织块法对其进行体外培养。 通过光学显微镜观察原代培养和传代培养阶段的细胞形态，检测第５代山羊瘤胃上皮细胞的生 长曲线，并采用细胞免疫荧光法对山羊瘤胃上皮细胞进行鉴定。 结果显示：１）经０．２５％胰蛋白 ＋ 酶 ０．０２％乙二胺四乙酸消化获得的原代培养山羊瘤胃上皮细胞于２ ｄ 开始贴壁生长，５ ｄ 细胞 开始明显增多，１０ ｄ 细胞数量达到最大。 ２）经组织块法获得的原代培养山羊瘤胃上皮细胞于 ４ ｄ开始“爬出”组织块，８ ｄ 细胞开始明显增多，１４ ｄ 细胞数量达到最大。 ３）经免疫荧光染色显 示２种方法获得的细胞胞浆内ＣＫ１８ 均呈阳性表达且细胞纯度后者明显高于前者。 ４）组织块法 获得的细胞ＣＫ１８表达量显著高于酶消化法（Ｐ＜０．０５）。 综合得出，与酶消化法相比，应用组织 块法可成功获得纯度更高的山羊瘤胃上皮细胞。 关键词： 山羊；瘤胃；上皮细胞；原代培养；分离；ＣＫ１８ 中图分类号：Ｓ８２６　 　 　 　 文献标识码：Ａ　 　 　 　 文章编号：１００６⁃２６７Ｘ（２０１６）０４⁃１２２５⁃０８ ［２］ 　 　 瘤胃是反刍动物消化代谢和营养物质吸收最 缺乏特定的膜受体插入该病毒无关；Ｏｂａ 等 研 重要的场所。 瘤胃壁由黏膜、黏膜下层、肌层、浆 究蔗糖、乳糖、玉米淀粉在瘤胃发酵中的影响以及 膜４层构成。 瘤胃上皮属于复层上皮，由黏膜向 瘤胃上皮细胞中的基因表达，结果发现用糖类代 浆膜面分为４ 层：角质化细胞层、颗粒细胞层、棘 替玉米淀粉会影响瘤胃发酵和代谢调节细胞内的 状细胞层和基底层。 瘤胃上皮有着重要的生理作 ｐＨ，以及细胞内的发酵酸吮现象，并且蔗糖比乳糖 用，如养分吸收与运输、挥发性脂肪酸代谢、对瘤 ［３］ 的效果更好；王佩等 研究枯草芽孢杆菌对绵羊 胃壁的保护。 因此，研究其生长发育及生理功能 － － 瘤胃上皮细胞 β 防御素 １基因表达的影响，发现 被人们所关注。 枯草芽孢杆菌能够诱导绵羊瘤胃上皮细胞内β－ 　 　 近年来，国内外对瘤胃上皮研究越来越多，并 － 防御素 １基因的表达。 将瘤胃上皮组织或者细胞应用于相关领域的病 　 　 但是对于瘤胃上皮细胞的培养方法比较还未 ［１］ 因、病理、营养等的研究。 例如：Ｓｔｕｍｐｆｆ 等 在研 见报道，大多采用酶消化