实验四动物组织中核酸的提取与鉴定.ppt.pptVIP

实验三 动物组织中核酸的提取与鉴定 实验三 动物组织中核酸的提取与鉴定 * 实验三 动物组织中核酸的提取与鉴定 2012-12 实验三 动物组织中核酸的提取与鉴定 实验三 动物组织中核酸的提取与鉴定 * 2012-12 一、实验目的 掌握动物组织中核酸提取与鉴定的基本原理及方法 通过实验掌握核酸的基本组成 熟悉移液枪、离心机、匀浆器的使用 实验三 动物组织中核酸的提取与鉴定 * 2012-12 二、实验原理 核酸（DNA、RNA）+ 蛋白质 → 核蛋白质 实验三 动物组织中核酸的提取与鉴定 * 2012-12 二、实验原理 1.核蛋白的提取： 肝组织匀浆 核蛋白沉淀 三氯醋酸 原因：三氯醋酸可沉淀蛋白质 2 .从核蛋白中提取核酸 核蛋白 蛋白质沉淀 + 核酸钠 10%NaCl 原因：10%的NaCl溶液中： 核酸的溶解度高 蛋白质的溶解度低 95%乙醇 核酸钠沉淀 实验三 动物组织中核酸的提取与鉴定 * 2012-12 二、实验原理 3.核酸（DNA、RNA）成分的鉴定 核酸钠 碱基 + 戊糖 + 磷酸 硫酸 （嘌呤、嘧啶） （核糖、脱氧核糖） 水解 实验三 动物组织中核酸的提取与鉴定 * 2012-12 1.磷酸 磷钼酸 钼蓝（蓝色） 钼酸铵 氨基萘酚磺酸 2.嘌呤碱 + 硝酸银 絮状嘌呤银化合物（灰褐色） 3.核糖 糠醛 绿色化合物 浓硫酸 3，5-二羟基甲苯 4.脱氧核糖 ω-羟基-γ-酮基戊醛 蓝色化合物 浓酸 二苯铵 实验三 动物组织中核酸的提取与鉴定 * 2012-12 三、实验操作 1.制备匀浆： 处死小鼠 取肝组织 生理盐水冲洗、吸干 匀浆管(小试管) 肝匀浆 三氯醋酸2ml 研磨 静置3’ 3000转/分,3’ 生理盐水2ml 搅拌 弃上清 沉淀 10%NaCl 2ml 沸水浴3’ （搅拌） 3000转/分,3’ 冷却 上清倒入 小试管 逐滴加95% 冷酒精2ml 白色沉淀 ①静置5’ ②3000转/分,5’ 弃上清 核酸钠沉淀 2.分离提取： 3.核酸的水解： 5%H2SO43.5ml （搅拌） 沸水浴加热10分钟 核酸的水解液 实验三 动物组织中核酸的提取与鉴定 * 2012-12 三、实验操作 4.RNA与DNA成分鉴定： （1）嘌呤碱的鉴定 管号 水解液 5%H2SO4 浓氨水 5%AgNO3 颜色变化 测定管 20d _ 2d 10d ? 对照管 _ 20d 2d 10d ? 放入沸水浴4分钟，观察变化，静置15分钟，比较沉淀 嘌呤碱 + 硝酸银 絮状嘌呤银化合物（灰褐色） 实验三 动物组织中核酸的提取与鉴定 * 2012-12 三、实验操作 （2）磷酸的鉴定 管号 水解液 5%H2SO4 钼酸铵 氨基萘酚磺酸 颜色变化 测定管 10d _ 5d 20d ? 对照管 _ 10d 5d 20d ? 放置3分钟，沸水浴4分钟，观察比较颜色差别 磷酸 磷钼酸 钼蓝（蓝色） 钼酸铵 氨基萘酚磺酸 实验三 动物组织中核酸的提取与鉴定 * 2012-12 三、实验操作 （3）核糖的鉴定 管号 水解液 5%H2SO4 3，5-二羟基甲苯 颜色变化 测定管 4d _ 6d ? 对照管 _ 4d 6d ? 沸水浴加热5~10分钟，观察比较颜色差别 核糖 糠醛 绿色化合物 浓硫酸 3，5-二羟基甲苯 实验三 动物组织中核酸的提取与鉴定 * 2012-12 三、实验操作 （4）脱氧核糖的鉴定 管号 水解液 5%H2SO4 二苯胺 颜色变化 测定管 20d （可用完） _ 30d ? 对照管 _ 20d 30d ? 沸水浴5~10分钟，观察比较颜色差别 脱氧核糖 ω-羟基-γ-酮基戊醛