水质总大肠菌群和粪大肠菌群纸片快速法检测方法确认表.docVIP

方法名称 水质总大肠菌群和粪大肠菌群的测定 （纸片快速法） 申请人 项目负责人员 制定原因 验证检测方法符合实验室要求、确保数据准确性与有效性 方法适用范围 适用于地表水、地下水及废水中的总大肠菌群和粪大肠菌群的快速测定。 方法来源 HJ 755-2015《水质 总大肠菌群和粪大肠菌群的测定纸片快速法》 仪器、试剂和环境的要求 1.仪器和设备 1.1高压蒸汽灭菌器 1.2培养箱 1.3冰箱 1.4 采样瓶 1.5 试管 1.6 水质总大肠菌群和粪大肠菌群测试纸片 2.试剂：2.1硫代硫酸钠 2.2乙二胺四乙酸二钠 采样和测试过程中，所用到的玻璃器皿需灭菌后方可使用。 方法描述 按MPN法，将一定量的水样以无菌操作的方式接种到吸附有适量指示剂（溴甲酚紫和2,3,5-氯化三苯四氮唑即TTC）以及乳糖等营养成分的无菌滤纸上，在特定的温度（37℃或44.5℃）培养24h，当细菌生长繁殖时，产酸使pH值降低，溴甲酚紫指示剂由紫色变黄色，同时，产气过程相当的脱氢酶在适宜的pH范围内，催化底物脱氢还原TTC形成红色的不溶性三苯甲（TTF）。即可在产酸后的黄色背景下显示出红色斑点（或红晕）。通过上述指示剂的颜色变化就可对是否产酸产气作出判断，从而确定是否有总大肠菌群或粪大肠菌群存在，再通过查MPN表就可得出相应总大肠菌群或粪大肠菌群的浓度值。 检测结果的判断 1.结果判读： 制片上出现红斑或红晕且周围变黄，为阳性。 纸片全片变黄，无红斑或红晕，为阳性。 纸片部分变黄，无红斑或红晕，为阴性。 纸片的紫色背景上出现红斑或红晕，而周围不变黄，为阴性。 纸片无变化，为阴性。 2.结果计算： 根据不同接种量的阳性纸片数量，查MPN表得到MPN值，按公式换算并报告1L水样中总大肠菌群或粪大肠菌群数： C=100*M/Q 式中： C—水样总大肠菌群或粪大肠菌群浓度（MPN/L） M—查MPN表得到的MPN值(MPN/100ml) Q—实际水样最大接种量（ml） 100—为10*10ml，其中，10将MPN值的单位MPN/100ml转换为MPN/L，10ml为MPN表中最大接种量。 3.结果表示： 测定结果保留二位有效数字，大于等于100时以科学计数法表示，结果的单位为MPN/L。平均值以几何平均计算。 附件说明 表1 运行说明 经验证该方法符合我实验室使用。 审批意见 技术经理： 日 期： 总经理： 日 期： 表1