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实验二 温度和pH对酶活性的影响 实验目的 1、了解温度对酶活性的影响； 2、了解酶活性的最适pH及掌握一种检测最适pH的方法 实验原理 酶的催化作用受温度的影响，在最适温度下，酶的反应速度最高。大多数动物酶的最适温度为 37～40℃，植物酶的最适温度为50～60℃。酶对温度的稳定性与其存在形式有关。有些酶的干燥制剂，虽加热到100℃，其活性并无明显改变，但在100℃的溶液中却很快地完全失去活性。低温能降低或抑制酶的活性，但不能使酶失活。淀粉和可溶性淀粉遇碘呈蓝色。糊精按其分子的大小，遇碘可呈蓝色、紫色、暗褐色或红色。最简单的糊精遇碘不显颜色，麦芽糖遇碘也不显色。在不同温度下，淀粉被唾液淀粉酶水解的程度，可由水解混合物遇碘呈现的颜色来判断。 酶的活力受环境pH的影响极为显著。不同酶的最适pH值不同。本实验观察pH对唾液淀粉酶活性的影响，唾液淀粉酶的最适pH约为6.8。 实验试剂 1、0.2%淀粉的0.3%氯化钠溶液 2、淀粉酶或稀释50～100倍的唾液 用蒸馏水漱口，以清除食物残渣，再含一口蒸馏水，半分钟后使其流入量筒并稀释50-100倍，(稀释倍数可根据各人唾液淀粉酶活性调整)混匀备用。 3、碘化钾-碘溶液 实验器材 1、试管及试管架 2、恒温水浴 3、冰浴 4、沸水浴 实验操作 摇匀后，将 1号、3号两试管放入37℃恒温水浴中，2号试管放入冰水中。10min后取出，将2号管内液体分为两半，用碘化钾-碘溶液来检验1、2、3管内淀粉被唾液淀粉酶水解的程度。记录并解释结果。将二号管剩下的一半溶液放入37℃水浴中继续保温10min后，再用碘液实验，结果如何? 各取不同pH的缓冲液3ml，分注入4支带有编号码的试管中，随后于每个试管中添加0.5%淀粉溶液2ml和淀粉酶2ml。将各试管内容物混匀，并依次置于37℃恒温水浴中保温。 每隔1分钟由第3管取出一滴混合液，置于白瓷板上，加1小滴碘化钾－碘溶液，检验淀粉的水解程度。待混合液变为棕黄色时，向所有试管依次添加1－2滴碘化钾－碘溶液。 观察各试管中物质呈现的颜色，分析pH对唾液淀粉酶活性的影响。 注意事项 1．加入酶液后，要充分摇匀，保证酶液与全部淀粉液接触反应，得到理想的颜色梯度变化。 2．取混合液前，应将试管内溶液充分混匀，取出试液后， 立即放回试管中一起保温。 思考题 1、唾液淀粉酶的最适温度是多少? 2、低温对酶有什么影响? 3、什么是酶的最适温度及其应用意义？ 4、什么是酶反应的最适pH？对酶活性有何影响？ * * 1 1.5 3 1 1.5 2 1 1.5 1 煮沸的淀粉酶（ml） 淀粉酶（ml） 淀粉溶液（ml） 管号 取 3支试管，编号后按下表加入试剂: 1、温度对酶活性的影响 8.0 0.28 9.72 4 6.8 2.28 7.72 3 5.8 3.95 6.05 2 5.0 4.85 5.15 1 pH 0.1mol/L柠檬酸（ml） 0.2mol/L磷酸氢二钠（ml） 锥形瓶号 取4个50ml锥形瓶，并编号。用移液管按下表添加0.2mol/L磷酸氢二钠溶液和0.1mol/L柠檬酸溶液制备pH5.0～8.0的四种缓冲液。 2、pH对酶活性的影响
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