普通生酮基古龙酸菌S2基因文库的构建和筛选-河北师范大学学报.PDF

第 32 卷/ 第 1 期/ 河北师范大学学报/ 自然科学版/ Vol . 32 No . 1 2008 年 1 月 J OURNAL OF HEBEI NORMAL UNIVERSITY/ Natural Science Edition/ J an . 2008 普通生酮基古龙酸菌 S 基因文库的构建和筛选 2 1 2 1 3 1 谢 　莉 , 　窦燕峰 , 　张 　铎 , 　张丽萍 , 　赵宝华 ( 1. 河北师范大学 生命科学学院 ,河北 石家庄 　0500 16 ; 2 . 石家庄制药集团 发展部 ,河北 石家庄 　05005 1 ; 3 . 河北省生物研究所 ,河北 石家庄 　050081) 摘 要 :在 Vc 生产的第 2 步发酵中 ,普通生酮基古龙酸菌 S2 能利用醇醛脱氢酶 ,将 L 山梨糖转化为 Vc 的前 ( ) 体 2酮基L 古龙酸 2 KL G . 对普通生酮基古龙酸菌 S 基因组 DNA 进行部分酶切 ,与黏粒载体 p KC505 连接后 , 2 α 用包装蛋白进行包装 ,转染大肠杆菌 DH5 ,构建成普通生酮基古龙酸菌 S2 基因组文库 ,得到 12 000 余个转化子. ( ) 再利用纯化的醇醛脱氢酶免疫家兔制备出合格抗血清 ,应用免疫酶斑点技术 DotEL ISA 对文库进行筛选 ,获得 1 个阳性克隆 K7 19 # . 通过检测此基因工程菌的活性 ,表明在添加辅酶 PQQ 后 , K7 19 # 具有使 L 山梨糖转化为 2 KL G 的功能 ,从而使醇醛脱氢酶在大肠杆菌中得到了表达 ,这为简化 Vc 的生产工艺奠定了基础. 关键词 :普通生酮基古龙酸菌 S ; 醇醛脱氢酶 ; 免疫酶斑点技术 ; 文库筛选 2 中图分类号 :Q 939 　　　文献标识码 :A 　　　文章编号 (2008) 0 10 10904 ( ) 维生素 C L 抗坏血酸 既是人体营养所必需的水溶性维生素 ,也是一种抗氧化剂 ,广泛应用于医药 、食 品、饲料 、化妆品等诸多领域 ,社会需求量很大 ,具有广阔的开发前景. 目前我国的 Vc 生产以二步发酵法为 [ 1 ] ( ) 主 ,这个过程包含 3 种细菌参与 :首先由生黑醋杆菌 A cetobacter m el anogen u m ,一步菌 转化