基因工程-第六章-真核基因在大肠杆菌中的表达.pptVIP

pPLc2833表达载体 调节型强启动子：能够使克隆的真核基因在大肠杆菌寄主细胞中最有效的高水平表达 组成： 1. 一个调节型的强启动子； 2. 一个用作选择记号的氨苄青霉素抗性基因ampr； 3. 一个直接位于PL启动子下游的多克隆位点（MCS）区 若由pKN402质粒的DNA复制起点取代pPLc2833质粒的DNA复制起点，由此形成的新质粒pCP3。它在大肠杆菌寄主细胞中指导外源蛋白质合成的有效性可得到有效的提高。而且这种质粒是温度敏感型的载体。（42度，拷贝数提高5～10倍） go 克隆的真核基因在 大肠杆菌细胞中的表达 外源蛋白质在大肠杆菌细胞中的表达部位 融合蛋白质的表达 1. 细胞质中表达 2. 周质中表达 3. 胞外表达 1.外源蛋白质在大肠杆菌细胞中的表达部位 细胞质中表达: 外源基因在大肠杆菌寄主细胞质中高效表达时，常会发生一种特殊的生理现象，形成包涵体（Inclusion Bodies，IB） 包涵体：存在于细胞质中的一种由不可溶性蛋白质聚集折叠而成的晶体结构物。影响其形成的关键因素：电荷的平均数、形成转角的氨基酸残基组分 优点： 1. 形成包涵体 a. 蛋白质易于以高纯度和高浓度方式分离 b. 蛋白质受保护而免受胞内酶的降解作用 c. 蛋白质没有活性，因