去除蛋白激酶A磷酸化位点的线粒体融合素2基因-中国动脉硬化杂志.PDF

968 ISSN 1007鄄3949 Chin J Arterioscler,Vol20,No 11,2012 ·实验研究 · [文章编号]摇 1007鄄3949(2012)20鄄11鄄0968鄄04 去除蛋白激酶 A磷酸化位点的线粒体融合素2基因对 血管平滑肌细胞凋亡的影响 1 2 3 4 周 炜 ,曹文静 ,陈莉莉 ,郭小梅 (1.武汉市中心医院心内科,湖北省武汉市430014;华中科技大学同济医学院附属同济医院 2.检验科,3.老年科,4.心内科,湖北省武汉市430030) [关键词]摇 线粒体融合素2基因;摇 血管平滑肌细胞;摇 细胞凋亡 [摘摇 要]摇 目的摇 研究大鼠线粒体融合素2基因在去除蛋白激酶A磷酸化位点后对大鼠血管平滑肌细胞凋亡的 影响及其相关的信号通路。 方法摇 利用携带去除蛋白激酶A磷酸化位点的线粒体融合素2基因重组腺病毒(Adv鄄 Mfn2鄄PKA(吟))和携带线粒体融合素2基因的重组腺病毒(Adv鄄Mfn2),感染培养的大鼠血管平滑肌细胞。 免疫印 迹分析相关蛋白的表达;激光共聚焦显微镜观察其亚细胞定位;细胞凋亡酶联免疫吸附法比较其对细胞凋亡的影 响;免疫印迹法分析磷酸化蛋白激酶B蛋白表达变化。 结果摇 外源基因转染后可表达特异性蛋白产物;激光共聚 焦显微镜显示去除蛋白激酶A磷酸化位点后的线粒体融合素2基因表达产物主要分布于线粒体外膜;酶联免疫吸 附法检测显示去除蛋白激酶A磷酸化位点后,线粒体融合素2基因诱导大鼠血管平滑肌细胞凋亡作用显著减弱(P 0郾01),与空白对照组差异无显著性;免疫印迹检测表明Mfn2鄄PKA(吟)组磷酸化蛋白激酶B表达较Mfn2组显著 升高(P0郾01),与空白对照组差异无显著性。结论摇 去除蛋白激酶A磷酸化位点的线粒体融合素2基因表达产 物仍主要分布于线粒体外膜,但其诱导血管平滑肌细胞凋亡的作用丧失,对蛋白激酶B信号通路也无抑制作用。 这表明蛋白激酶A磷酸化位点是调控线粒体融合素2基因诱导血管平滑肌细胞凋亡的重要功能位点。 [中图分类号]摇 R363 [文献标识码]摇 A Effect of Removal of Protein Kinase A Phosphorylation Site from Mfn2 Gene on the Apoptosis of Vascular Smooth Muscle Cell 1 2 3 4 ZHOU Wei ,CAOWen鄄Jing ,CHEN Li鄄Li ,and GUOXiao鄄Mei (1.Department of Cardiology,the Central Hospital of Wuhan,Wuhan,Hubei 430014,China;2. Clinical Laboratory,3. Geriatrics,4.Departmentof Cardiology,TongjiHospital,TongjiMedical College,Huazhong University of Science and Tech鄄 nology,Wuhan,Hubei430030,China) [KEY WORDS]摇 Mitofusin2;摇 Vascular Smooth Muscle Cell;摇 Apoptosis [ABSTRACT]摇 摇 Aim摇 To investigate the effect of mitofusin2 (Mfn2) with the removal of protein kinase A (PKA)