自动生物化学分析仪的应用与原理..pptVIP

自动生物化学分析仪的应用与原理 自动生物化学分析仪的特点: 精密度高，功能齐全； 可进行吸光度、浓度和酶活力的测定，能使用终点法和连续监测法进行分析； 具有快速、简便、微量、标准化、样品和试剂用量低等优点。 一、分析方法的种类 (一)终点分析法(平衡法) 终点分析法是基于反应达到平衡时反应产物的吸收光谱特征及其对光吸收强度的大小，对物质进行定量分析的一类方法，它是实验室最常用的方法之一。 一点终点法：一点终点法的特点是使用一种或两种试剂。当样品和试剂混合后，待测物与试剂的物理化学反应达到终点时，测定吸光度,计算待测物的浓度。该法具有代表性的试验有：总蛋白、清蛋白、葡萄糖氧化酶法等。 一点终点法——在时间-吸光度曲线上吸光度不再改变时，选择一个时间点测定吸光度值。 通常在反应终点附近连续读两个吸光度，求出两点的平均值，并根据两点的差值判断反应是否达到平衡。 一点终点法的设置： 以R和S混合之前的空气空白、水空 白或试剂空白的吸光度值为测定计算基点，以反应达到平衡的吸光度读数减去空白读数，校准曲线通过零点且成直线，对于反应速度快的多用。 如：GLU TG CH等 * * Al T （时间） A S+R (吸光度） 一点终点法反应曲线 计算公式： C=(Am-Ab)*K Am----终点读数点的吸光度 Ab----试剂空白吸光度 K----校正系数 两点终点法：两点终点法也称固定时间法，它可以用一种试剂，也可以用两种试剂。该方法的优点是可以消除样品、试剂的颜色、浊度，以及一些干扰物质对测定的干扰。 第二试剂加入以前，选择某一点读取吸光度Am，经过一定时间后反应达终点后测 第二个吸光度值An,利用两吸光度之差计 算结果。 第一点吸光度值由样本本身或第一试剂与样品的非特异性反应有关，相当于样品空白，可有效的消除样品自身的吸光度，如溶血，黄疸，脂血等的干扰。 * * An T A R2 Am S+R1 (吸光度） （时间） 两点终点 Ax= 样本空白 An - k0 Am （体积校正因子）k0 = Sv+Rl Sv+R1+R2 两点终点法 计算公式： C=(An-K0*Am)*K K0---体积校正因子 K0=(Sv+R1)/(Sv+R1+R2) 双波长法：其原理是检测计在对一待测物进行检测时，同时用两个波长检测，用主波长的吸光度减去副波长的吸光度，标准物与待测物同等对待，计算待测物的浓度。 双波长法 消除样品中对测定有干扰的物质的影响； 在试样中含有两个组分a和b时，若要测定组分b,组分a有干扰，应设法消除组分a的吸收干扰。首先选择待测组分b的最大吸 收波长λ1作为测量波长，然后用作图的方法选择参比波长λ2 ，使组分a在这两个波长处的吸光度相等。 双波长法 试样溶液在λ2和λ1两个波长处的吸光度之差，只与待测组分的浓度成正比，而与干扰组分的浓度无关 干扰物质 1.脂血：吸收光谱300～600nm呈下降趋势 2.Hb：350nm、400nm、540nm、580nm 吸收峰 3.胆红素：300～500nm有吸收峰 可见它们的吸收峰都较宽，且同测定波长 有重叠现象。 双波长法 主波长的选择 反应体系中待测组分吸收峰对应的波长，尽量避开或减少来自试剂空白和样本空白对测定组分的干扰，提高特异性和灵敏度。 双波长法 辅助波长的选择： 根据测定波长选择辅助波长，要求干扰物质在测定波长同辅助波长有相同的吸光度，待测物吸光度差异很大。 如:钼酸铵法测P3＋用340nm，而Hb在340 及380nm均有较高吸收峰，选380nm作为辅助波长。 双波长法 双波长测定优点 ： ①消除噪音干扰 ②减少杂散光影响 ③减少样品本身光吸收的干扰 (二)连续监测法 测定底物的消耗或产物生成速度的化学方法称为连续监测法。它是通过适当的仪器，连续测定酶促反应过程中某一反应产物或底物的浓度随时间变化的多点数据，求出酶反应初速度，间接计算酶活性浓度。 具体方法有： 1．两点速率法 2．多点速率法 3．回归法 4．带速率时间法 (三)比浊测定法 通过检测物质对光的散射或透射强度来测定