绿尾大蚕峨核型多角体-南京林业大学学报.PDF

南京林业大学学报 Vol.13 No. 2 第13 卷第2 期 JOURNAL OF NANnNG June 1 9 8 9 1989年 6 月 PORE盯RY UNIVERSITY 绿尾大蚕峨核型多角体 病毒DNA 抽提与鉴定* 沈苓 乐美麟 〈基础课部〉 摘要 绿尾大蚕娥 (Act ias se lene ningpoana Felder) 核型多角体病毒 DNA (As NPV DNA) ，用盼-SDSi去从病毒粒子中抽提。紫外吸收光谱测定最高和最低吸 收值分别在258nm和232nm灶。在0.7%琼脂黯凝胶电泳中， NPV DNA呈均一片 段，经测定其T 值为86OC ， G + C 含量为41%。抽提的DNA经注射寄主幼虫，有 m 一定的感染活性，感病虫表现核多角体病的典型症状。 美键词绿尾大蚕娥，核型多角体病毒 DNA 抽提 鉴起 J s 昆虫核型多角体病毒 (Nuclear Polyhedrosis Virus 简称NPV) 是一类具有包含体的 DNA病毒，属忏状病毒科 (Baculo叮叮dae) 杆状病毒属 (Baculovirus) A亚组[11 。 NPV 广泛分布在昆虫中，具有种属特异性和对脊椎动物安全等特佳，是一类很有发展前途的生物 杀虫剂[2. 1 。绿尾大蚕娥核型多角体病毒 (Actias selene ningpoana NPV简称As NPV) 的形态特征、生物学特住和致病性等巳有报道[3 J 。本文报道As NPV DNA的抽提及部分 理化性质的测定结果。 一、仪器、试剂和材料 1. 仪器 Hi tachi 20PR-520 型高速冷冻离心机J Shimadzu UV-120-02 型紫外可见a 分光先度计J Backman DU- 7 型紫外可见分光光度计J UV-l 型紫外分析仪。 2. 试剂 十二;皖基硫酸铀 (SDS) 用95%乙醇回流 6 小时重结晶1 苯勘经重蒸后使用， SSC缓冲液 O.15MNaCI-O.015M拧攘酸制 (pH7.0) 0 收稿日期I 1988年 7 月 15 日。 ·电镜照片由本校电镜室拍摄，谨藏谢意。 宁 8. 供试病毒 由本校森林昆虫防治实验室提供As NPV原军队 二、试验方法 1. As NPV的增殖和纯化 民j 甘油保存的As NPV给三龄绿尾大蚕峨幼虫添食，取表现典型症状的病虫血淋巴，用 皮下穿刺法接种感染。接种前进待体表消毒6 发病后收集病死虫加蒸馆7.1匀浆。匀浆液用四 层纱布过憾，滤液以4000r/min 离心30mino 取沉淀反复用蒸馄水洗涤，再